Question

12．为了调查某市自来水水源地的水质情况，某研究小组对该地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定，请回答下列问题：
（1）该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌，划线时在培养基上共画了4个区域，则需要
5次灼烧接种环．在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以获得单个菌落．
（2）如果是用试管培养微生物，在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是扩大接种面积．接种时需在酒精灯火焰旁操作的原因是：为避免周围环境中微生物的污染．
（3）检测自来水中大肠杆菌，若其中加入蛋白胨，蛋白胨能提供的主要营养有碳源、氮源和维生素．该研究小组在统计菌落数目时，为防止因培养时间不足而遗漏菌落数，应培养至菌落数目稳定（必须说出数目，菌落稳定不给分）时，再计数．
（4）若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
将1ml自来水稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中大肠杆菌活菌数为4.3×10⁷个/L．
（5）若要测定培养液中的菌体数，也可在显微镜下用血细胞计数板直接计数．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、划线分离操作中的有关问题：
①在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环．

	第一次灼烧	每次划线之前灼烧	划线结束灼烧
目的	避免接种环上可能存在的微生物污染培养基	杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种	杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染或感染操作者

②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种．
③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线．每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落．
3、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

解答 解：（1）采用平板划线法纯化微生物时，每次划线之前都要灼烧接种环，划线结束后还需灼烧接种环，若划线时在培养基上共画了4个区域，则需要5次灼烧接种环；每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，这样可以将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（2）如果是用试管培养微生物，在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是扩大接种面积．接种时需在酒精灯火焰旁操作，这是为了避免周围环境中微生物的污染．
（3）培养基中加入的蛋白胨能提供的主要营养有碳源、氮源和维生素．该研究小组在统计菌落数目时，为防止因培养时间不足而遗漏菌落数，应培养至菌落数目稳定时，再计数．
（4）若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
将1ml自来水稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中大肠杆菌活菌数为$\frac{42+43+44}{3}$×100×$\frac{1}{0.1}$×1000=4.3×10⁷个/L．
（5）若要测定培养液中的菌体数，也可在显微镜下用血细胞计数板直接计数．
故答案为：
（1）5    将聚集的菌体逐步稀释以获得单个菌落
（2）扩大接种面积    为避免周围环境中微生物的污染
（3）碳源、氮源和维生素         菌落数目稳定（必须说出数目，菌落稳定不给分）
（4）检测培养基平板灭菌是否合格       4.3×10⁷个/L
（5）血细胞计数板

点评 本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物的培养的相关知识的理解与掌握．