Question

12．回答下列生物科技及其实践的相关问题：
（1）培育转基因抗虫棉时为构建重组DNA分子通常要用同种限制酶分别切割含有目的基因的DNA和运载体．将重组DNA转入农杆菌时，可以用Ca²⁺处理农杆菌，使重组DNA易于导入．
（2）科学家利用番茄叶细胞和马铃薯叶细胞杂交培育“番茄-马铃薯”植株的过程中，首先要纤维素酶和果胶酶解除去植物细胞的细胞壁，以使植物原生质体相互分离；在动物细胞培养技术中，使细胞分离开来的酶是胰蛋白酶．
（3）进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和动物血清．
（4）分离细菌时通常用固体培养基，原因是固体培养基可以为细菌提供表面附着和营养物质．与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和细胞分裂素，这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用．使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢掉，以防止培养物的扩散．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、植物体细胞杂交的具体过程：

3、动物细胞培养条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．

解答 解：（1）构建重组DNA分子时通常用同种限制酶分别切割含有目的基因的DNA和运载体，以产生相同的黏性末端．将目的基因导入微生物细胞时常有感受态转化法，即用Ca²⁺处理微生物细胞，使之处于易于吸收周围环境中DNA的感受态，便于重组DNA导入．
（2）植物体细胞杂交过程中，首先要纤维素酶和果胶酶解除去植物细胞的细胞壁，以使植物原生质体相互分离；在动物细胞培养技术中，使细胞分离开来的酶是胰蛋白酶．
（3）进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和动物血清．
（4）分离细菌时通常用固体培养基，因为固体培养基可以为细菌提供表面附着和营养物质．与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和细胞分裂素，这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用．使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢掉，以防止培养物的扩散．
故答案为：
（1）含有目的基因的DNA      运载体      Ca²⁺
（2）纤维素酶和果胶       胰蛋白酶
（3）动物血清
（4）固体培养基可以为细菌提供表面附着和营养物质       细胞分裂素     母液    灭菌

点评 本题综合考查基因工程、细胞工程、微生物的分离和培养，要求考生识记基因工程的操作工具及操作步骤；识记植物体细胞杂交的具体过程及动物细胞培养的过程；识记无菌技术及接种微生物常用的两种方法．