Question

7．如图为人工合成reAnti基因，转入猪成纤维细胞，做成转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）人工合成的reAnti基因可通过PCR技术手段迅速扩增．
（2）过程③要将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的方法是显微注射法，重组质粒导入之后，可通过DNA分子杂交技术，来检测reAnti基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上．
（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，然后进行分散培养．培养时，向培养箱中通入CO₂的目的是维持培养液的PH值；培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，一般还应添加动物血清．
（4）去核前的卵母细胞应培养到减数第二次分裂中期期．其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞．再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚胎．
（5）在进行过程⑦操作前，应利用激素对受体母猪进行同期发情处理．

Answer 1

分析 分析题图：①是获取目的基因的过程；②是基因表达载体的构建过程；③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的过程；④采用显微技术去核；⑤是核移植过程；⑥动物细胞培养过程；⑦是胚胎移植过程；⑧是妊娠形成转基因克隆猪的过程．

解答 解：（1）人工合成的reAnti基因可通过PCR技术手段扩增．
（2）将目的基因导入动物细胞常用显微注射法；检测目的基因（reAnti基因）是否导入受体细胞，可用DNA分子杂交技术．
（3）动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，使动物细胞分散成单个细胞．动物细胞培养时要放入到95%的空气（保证细胞代谢）和5%CO₂（调节培养液的pH）培养箱中．培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，一般还应添加动物血清．
（4）去核前的卵母细胞应培养到减数第二次分裂中期才成熟．
（5）胚胎移植前，应利用激素对受体母猪进行同情发情处理，目的是使胚胎移植入相同的生理环境．
故答案为：
（1）PCR        
（2）显微注射法        DNA分子杂交
（3）胰蛋白酶或胶原蛋白酶        维持培养液的PH值        动物血清
（4）减数第二次分裂中期        
（5）同期发情

点评 本题结合我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，考查基因工程的原理和技术、动物细胞核移植技术、动物细胞培养，要求考生识记基因工程的原理及操作过程，能准确判断图中各过程的名称；识记动物细胞核移植的概念及过程；识记动物细胞培养的过程及条件．