Question

13．据报道，科学家把带有人肝细胞再生增强因子的基因片段，整合到羊的乳腺上皮细胞DNA中，再将带有外源基因的乳腺上皮细胞核移植到去核卵细胞中，培育出了一只克隆羊，其乳汁中可以提炼出含有人肝细胞再生增强因子的物质．请据此回答下列问题：
（1）将基因表达载体导入乳腺上皮细胞常用的方法是显微注射法．
（2）若要检测乳腺上皮细胞染色体上是否含有人肝细胞再生增强因子的基因，可采用DNA分子杂交技术．
（3）已知BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如图所示：

用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和序列明显增多，该过程中DNA连接酶能催化磷酸二酯键的形成．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）将基因表达载体导入动物受体细胞常用显微注射法．
（2）若要检测乳腺上皮细胞染色体上是否含有人肝细胞再生增强因子的基因，可采用DNA分子杂交技术．
（3）图中DNA两片段经酶切后共得到四个片断，切割后形成的黏性末端相同，其中有二个片段组成了已知序列，则另一序列必为剩余的二个片段组成．DNA连接酶催化连接的是磷酸二酯键．
故答案为：
 （1）显微注射法
（2）DNA分子杂交
（3）　        磷酸二酯

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，了解基因工程技术的相关应用，能运用所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查．