Question

4．如图是基因表达载体结构示意图，请根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）图中A段的功能是终止转录，抗生素抗性基因可作为标记基因．
（2）构建基因表达载体时需要用到两种工具酶．若所使用的限制酶仅有SmaⅠ，其识别的碱基序列和酶切位点为CCC^↓GGG，则要求使用T₄DNA连接酶；有时发现在条件适宜时，部分重组质粒中目的基因与质粒反向不正常连接，则该目的基因不能（能/不能）正确表达．
（3）若要获得转基因抗虫水稻，常用的将目的基因导入水稻细胞的方法是农杆菌转化法．检测抗虫基因是否在水稻植株体内发挥功能的第一步，采用分子杂交技术；最终还需要进行个体生物学水平的鉴定，即需要做进行抗虫的实验．
（4）若要获得一种转基因猪，利用其乳腺生物反应器生产人类凝血因子Ⅷ（简称F₈），F₈基因可从
cDNA文库中获取，若要在体外大量复制，常采用PCR技术，这样获得的目的基因，不能（能/不能）用作人类基因组测序．构建基因表达载体时，在F₈基因的首端必须有乳腺蛋白基因的启动子．

Answer 1

分析 1、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因，其中启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；标记基因便于目的基因的鉴定和筛选．
2、分析题图：图示为基因表达载体的模式图，基因表达载体包括复制原点、启动子、终止子、目的基因（插入基因）、标记基因（抗生素抗性基因）等．

解答 解：（1）图中A段为终止子，其功能是终止转录，抗生素抗性基因可作为标记基因，便于筛选含有重组子的受体细胞．
（2）限制酶SmaⅠ的识别的碱基序列和酶切位点为CCC^↓GGG，其切割形成平口末端，只有T₄DNA连接酶能够连接平口末端；有时发现在条件适宜时，部分重组质粒中目的基因与质粒反向不正常连接，则该目的基因不能正确表达．
（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；检测抗虫基因是否在水稻植株体内发挥功能的第一步，采用分子杂交技术；最终还需要进行个体生物学水平的鉴定，即需要做进行抗虫的实验．
（4）PCR技术可体外大量复制目的基因；cDNA文库中不含启动子、内含子等，因此这样获得的目的基因不能用作人类基因组测序．构建基因表达载体时，在F₈基因的首端必须有乳腺蛋白基因的启动子．
故答案为：
（1）终止转录    标记基因
（2）T₄      不能
（3）农杆菌转化法     分子杂交    进行抗虫的实验
（4）PCR     不能     启动子

点评 本题结合基因表达载体的模式图，考查基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的原理、工具、操作步骤及应用，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查．