36、目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于                     。

（2）pBR32Z分子中有单个EcoRI限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRI的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端。                    。

（3）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复          键，成功的获得了重组质粒。说明                                      。

（4）为了检测上述重组质粒是否导入原本无amp^R和tet^R的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是                 ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是                  。

五、综合题

（每空？ 分，共？ 分）

35、糖尿病是一种常见病，且发病率有逐年上升的趋势。下图是利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，请据图回答。

（1）过程②必需的酶是            酶。

（2）能否利用人的皮肤细胞来完成①的过程？       ，为什么？                                              

                                                                  。

（3）若A中共有a个碱基对，其中腺嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行5次，至少需要提供鸟嘌呤         个。

（4）在利用AB获得C的过程中，必须用                切割A和B，再加入                 ，才可以形成C。

（5）在进行基因工程操作过程中，胰岛素基因必需与运载体——质粒结合后才能进入大肠杆菌体内，并且在细菌内增殖。质粒的化学本质是一种                   。

（6）不同生物间基因的移植成功，说明生物共用一套                    。

34、下图为利用生物技术获得生物新品种的过程．据图回答：

（1） 在基因工程中．A→B为____________技术。利用的原理是_______________，其中a为：_______________的过程，b过程使用的酶是___________________。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，c过程用到的生物技术主要有动物细胞培养和______________技术．在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有—定量的CO₂，其主要作用是_______________________。

（3）B→—D为抗虫棉的培育过程，其中d过程常用的方法是__________________，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作。请写出在个体水平上的鉴定或方法过程：__________________________。

33、以重组DNA技术为核心的基因工程正在改善着人类的生活。请回答下列问题：

（1）获得目的基因的方法通常包括                和                     。

（2）切割和连接DNA分子所使用的酶分别是               和                。

（3）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或             ，后者的形状成   。

（4）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率          。所以在转化后通常需要进行             操作。

（5）将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者生产的胰岛素在功能和

        序列上是相同的。

32、降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。

在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：

（1）Klenow酶是一种________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。

（2）获得的双链DNA经EcoRⅠ（识别序列和切割位点-G^↓AATTC-）和BamHⅠ（识别序列和切割位点-G^↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。

①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它_________________________。

②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是___________________________。

③要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有_______________。

（3）经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是_______________。

（4）上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是____________________。

31、科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—，据图回答：

（1）过程①表示的是采取                   的方法来获取目的基因。

（2）根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶         切割质粒，用限制酶     酶切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过          原则进行连接。

   （3）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是             。

（4）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为                  。

写出目的基因导入细菌中表达的过程                                     。

（5）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了                  ，反之则没有导入。

30、（多选）基因工程是现代育种技术中非常重要的一种手段，通过该技术课让细菌生产人类的胰岛素。以下相关说法正确的是                                                                                           （    ）

    A．人与细菌的DNA的结构基础相同         

    B．细菌与人类共用一套遗传密码

    C．能高效表达人胰岛素基因的细菌是工程菌  

    D．基因工程育种可能存在生态安全问题

四、填空题

（每空？ 分，共？ 分）

29、（多选）关于限制性内切酶的说法中，正确的是                                                 （    ）

    A．主要从真核生物中分离纯化出来          

    B．能在特定的位点上切割DNA分子

    C．对目的基因和运载体必需用两种特定的限制性内切酶进行切割，产生特定的黏性末

端

    D．一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列

28、（多选）在基因工程中，作为基因运输工具的运载体，必须具备的条件有             （    ）

A．能够在宿主细胞中复制，并稳定地保存    

B．具有多个限制酶切点

C．必须是细菌的质粒或噬菌体              

D．具有某些标记基因

27、（多选）在判断抗虫基因是否成功转入棉花基因组的方法中，属于分子检测的是（    ）

    A．通过观察害虫吃棉叶是否死亡

    B．检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带

    C．检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带

    D．检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带