（11分）如图所示为一种限制酶切割DNA分子的过程，请据图回答下列问题：

（1）这种限制酶的切点在___________________      ___________________  之间。
（2）这种限制酶的特点是______________________________________________      。
（3）如果是G碱基发生基因突变，可能发生的情况是___________________      ___。
（4）这种酶产要在存在于_________________中。
（5）若用该酶从苏云金芽孢杆菌中提取到了抗虫基因，要将该基因导入棉花细胞中获得抗虫棉，则所需运载工具是__________，最常用的是__________，另外还有______________________。和___________   该运输工具具有的特点是：有多个______________________；在受体细胞内可进行________________；具有特殊的____________________。

根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：
⑴绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列如下   红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列如下
……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……                ……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……
……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……                ……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……
其中，     ▲     DNA分子含有“目的基因”。
⑵用剪刀代表限制酶进行切割，该酶切位点在     ▲    （a处还是b处），此化学键称为     ▲    。

⑶你模拟插入的DNA片断能称得上一个基因吗？     ▲     。
⑷从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的     ▲    的群体。按照其中所含基因的量又可分为     ▲     文库、     ▲    文库。

根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：

⑴绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列如下   红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列如下

     ……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……                ……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

     ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……                ……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……

根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：（已知EcoRI酶识别序列为GAATTC，识别位点为G||A）

（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：      

……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……     

……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……      

……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……      

其中，           DNA分子含有“目的基因”，            DNA分子是“质粒”。

（2）用剪刀代表进行切割。酶切位点在         （a处还是b处），此化学键称为              。

（3）请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。

（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的                         的群体。按照其中所含基因的量又可分为               文库和              文库。

（5）基因表达载体的构建是基因工程的关键步骤之一，请根据所给的条件完成下列问题：

     已知有4种限制性核酸内切酶，其中1号和4号切割DNA后产生的是平末端，2和3号酶产生的是黏性末端。含目的基因的DNA片段和质粒的酶切序列如下图所示：

① 请设计酶切方案，构建最佳基因表达载体（重组质粒）                                                                     。

②该重组质粒上有几个复制原点：    ，能用PCR技术扩增吗      （能或不能）

③若用酶2和3切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：         。

  若用酶2和1切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：         。

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有　 　 个游离的磷酸基团。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　 　 。

（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是　 　 。

（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　 　　　　　　　　　　 。

（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　 　 酶。

（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　 　　　　　。

（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能

力的大肠杆菌突变体，然后在　 　 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

（8）用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。