Question

【题目】酸菜是经乳酸菌发酵而成的一种发酵食品，制作过程中极易积累亚硝酸盐。一些乳酸菌能合成亚硝酸盐还原酶，能够显著降低亚硝酸盐含量。请回答相关问题。

（1）为获得高产亚硝酸盐还原酶的乳酸菌，某研究组以东北传统自然发酵酸菜为材料进行分离。

①在进行乳酸菌分离纯化时，科研人员将酸菜发酵液稀释后涂布在含溴甲酚绿（遇酸变色）的__________（“选择”或“鉴别”）培养基上，___________（“需氧”或“厌氧”）培养一段时间后，挑取周围变色的_________临时保存。

②在进行高产亚硝酸盐还原酶菌株筛选时，将临时保存的各菌种分别接种到含______的液体培养基中培养一段时间，离心收集上清液，在________酸化条件下，依次加入对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐进行反应，筛选反应显色较_____的菌株。

（2）利用筛选得到的菌种进行酸菜腌制，测定亚硝酸盐含量（单位：mg/kg），结果如下表所示：

据表分析，亚硝酸盐含量最高时的腌制条件是________________________。为避免细菌大量繁殖，产生大量的亚硝酸盐，除控制好表中涉及的腌制条件外，还需控制好腌制的____________。

Answer 1

【答案】鉴别 厌氧 （单个）菌落 亚硝酸盐（或NaNO2） 盐酸 浅 食盐用量5%，腌制7天 温度

【解析】

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基属于选择培养基；使用选择培养基的目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计的培养基属于鉴别培养基，其用途为：鉴别和区分菌落相似的微生物，如伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌。

（1）①由于溴甲酚绿遇酸变色，故培养基中的微生物若能产生酸性物质，可出现一定的颜色变化，可据此判断培养基中是否含有乳酸菌等能产生酸性物质的菌体，故含溴甲酚绿（遇酸变色）的培养基属于鉴别培养基。由于一个菌落可由一个菌体繁殖产生，故厌氧培养一段时间后，为保证菌体的纯度，可挑取周围变色的（单个）菌落临时保存。
②亚硝酸盐还原酶可将亚硝酸盐还原，故能够高产亚硝酸盐还原酶的菌株能将培养液中的亚硝酸盐大量还原，使培养液中亚硝酸盐含量下降。对亚硝酸盐含量测定的原理是：亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。所以在进行高产亚硝酸盐还原酶菌株筛选时，将临时保存的各菌种分别接种到含亚硝酸盐（或NaNO2）的液体培养基中培养一段时间，离心收集上清液，在盐酸酸化条件下，依次加入对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐进行反应，筛选反应显色较浅的菌株。
（2）据表分析，亚硝酸盐含量最高时的腌制条件是食盐用量5%，腌制7天。为避免细菌大量繁殖，产生大量的亚硝酸盐，除控制好表中涉及的腌制条件外，还需控制好腌制的温度。