Question

【题目】（三）回答下列有关微生物与基因工程有关的问题

【1】基因工程的第一步是获取目的基因，获取的方法包括__________和化学方法人工合成。如果要想获取人的胰岛素基因，只能用化学方法人工合成，具体的做法是从人体__________细胞中获取胰岛素mRNA，再通过__________过程即可获得目的基因。

【2】基因工程的第二步是将目的基因和运载体重组，重组时需要选择合适的限制酶和________酶。常用的运载体是细菌质粒（如图示），

质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列。青霉素抗性基因作为__________基因，以便于筛选。质粒上还有多种限制酶的切点，若目的基因上也有上述质粒中相应限制酶的切点，为避免目的基因自身的环化并能与图中质粒准确重组，可选用的限制酶是____

A. NdeI和XbaI B. NdeI和BamHI C. XbaI D. PstI E. BamHI

【3】基因工程的第三步是将重组质粒导入受体细胞，例如，转基因动物常用的受体细胞为____________。

【4】基因工程的第四步是筛选出导入重组质粒的受体细胞。

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，则该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因，请阐述其原因？_______________________________________________________。

（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有____（多选）

A. 细胞分裂素 B. 琼脂 C. 噬菌体 D. 青霉素

Answer 1

【答案】

【1】从某种生物体细胞中分离胰岛B逆转录

【2】DNA连接标记B

【3】受精卵

【4】若含有则会干扰筛选BD先调节pH后灭菌高压灭菌涂布法划线法AC

【解析】本题考查基因工程、微生物的培养，考查对基因工程操作程序、培养基种类和配制方法的理解和识记。

【1】获取目的基因的方法包括从某种生物体细胞中分离和化学方法人工合成。获取人的胰岛素基因，可以从人体胰岛B细胞中获取胰岛素mRNA，再通过逆转录过程即可获得目的基因。

【2】将目的基因和运载体重组时需要选择合适的限制酶和DNA连接酶，以保留ori、启动子、终止子，同时保留青霉素抗性基因作为标记基因，以便于筛选。为避免目的基因自身的环化并能与图中质粒准确重组，应选用两种不同的限制酶，可选用的限制酶是NdeI和BamHI，选择NdeI和XbaI会导致终止子被切除。

【3】由于分化的动物体细胞难以表达全能性，转基因动物常用的受体细胞为受精卵。

【4】（1）根据质粒上的青霉素抗性基因在大肠杆菌中是否表达判断目的基因是否进入大肠杆菌，若大肠杆菌中含有青霉素抗性基因，则会干扰筛选。

（2）筛选含有重组质粒的大肠杆菌，应使用固体培养基，培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还需加入琼脂和青霉素。

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节PH的先后顺序是先调节PH后灭菌；一般对配置的培养液采用高压法灭菌。

（4）据图可知获得图A效果的接种方法涂布法，获得图B效果的接种方法是划线法。

（5）嗜热菌耐高温的原因是细胞的DNA中碱基G和C含量较高，氢键较多，所以DNA较稳定。