Question

【题目】a-干扰素是由人的白细胞产生的一种蛋白质，是抗病毒的一类特效药，人类利用基因工程技术已经大批量生产干扰素。回答下列问题:

(1)利用逆转录的方法合成a-干扰素基因时，所用的mRNA应从白细胞中提取，原因是_______这种方法合成的基因要比细胞内-干扰素基因短的原因是___________。

(2)在体外可利用PCR技术扩增a-干扰素基因，扩增过程是:目的基因DNA受热变性后解链为单链，___________与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此循环多次。该过程中，反应体系将温度调控到70-75℃时，反应体系内进行的反应是_____。

(3)将扩増的-干抗素基因与运载体拼接成重组DNA需要用到的工具酶是____________.将重组DNA导入大肠杆菌内需用到钙离子，原因是_____________________。

Answer 1

【答案】白细胞中有转录干扰素的mRNA 逆转录法合成的基因由于没有启动子、终止子、内含子等结构 引物 DNA聚合酶以目的基因为模板，将4种脱氧核糖核苷酸逐个按照碱基互补配对原则连接在引物之后，使合成的新链延伸，形成互补的DNA双链 限制性酶和DNA连接酶 用处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态

【解析】

PCR技术的流程：在高温下（如95℃），作为模板的双链DNA解旋成单链DNA；反应体系温度降低时（如55℃），引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合；反应体系温度回升时（如72℃），DNA聚合酶以目的基因为模板，将4种脱氧核糖核苷酸逐个按照碱基互补配对原则连接在引物之后，使合成的新链延伸，形成互补的DNA双链。如此进行多个循环，可以有选择地大量扩增需要的DNA片段。

（1）α干扰素是由人的白细胞产生的一种蛋白质，白细胞中有转录干扰素的mRNA，再通过逆转录，转录出干扰素基因，用逆转录法合成的基因由于没有启动子、终止子、内含子等结构，故逆转录法合成的基因要比细胞内-α干扰素基因短。

（2）PCR技术的基本过程是：在高温下，目的基因DNA受热变性后解链为单链；温度降低，引物与单链相应互补序列结合；反应体系温度回升到70-75℃时，DNA聚合酶以目的基因为模板，将4种脱氧核糖核苷酸逐个按照碱基互补配对原则连接在引物之后，使合成的新链延伸，形成互补的DNA双链。

（3）将扩増的-干抗素基因与运载体拼接成重组DNA需要用到的工具酶是限制性酶和DNA连接酶。将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即用处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。