Question

8．国家饮用水标准规定，每升饮用水中大肠杆菌不超过3个．某小组欲通过实验来检测自来水中大肠杆菌的含量，已知大肠杆菌在伊红-美蓝培养基培养，大肠杆菌菌落呈深紫色．请根据下列有关实验步骤回答问题：

（1）配制培养基：配制伊红-美蓝培养基时，除蛋白胨、乳糖、伊红、美蓝等原料外，还需要水、无机盐和琼脂．在这些成分中，能为大肠杆菌提供氮源的是蛋白胨．搅拌加热至完全溶解后调节PH，分装到锥形瓶．
（2）倒平板：配制好的培养基用高压蒸汽灭菌 法灭菌后，待培养基冷却到50℃左右倒平板．平板冷凝后应将平板倒过来（倒置） 放置，以防止皿盖上的水珠落人培养基．
（3）接种：在下图的系列稀释操作中（10¹、10²、10³表示稀释倍数），依次将1mL液体移人下一个盛有9 mL蒸馏水的试管中．过程a所用的接种方法为（稀释）涂布平板法．
（4）观察与计数：通过一段时间的培养，观察统计培养皿表面深紫色菌落的数目，结果如图所示，则自来水样本中大肠杆菌超标1000 万倍．
（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量可能多，原因是当两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上观察的是一个菌落．

Answer 1

分析 培养基根据物理性质可分为固体培养基和液体培养基，培养基的基本营养成分有碳源、氮源、无机盐、水等成分；灭菌和消毒的主要区别是：消毒是指使用较为温和的物理或化学方法反杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）；灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子．

解答 解：（1）该培养基为固体培养基，故要加入凝固剂琼脂，培养基的基本营养成分有碳源、氮源、无机盐、水等成分，能为大肠杆菌提供氮源的是蛋白胨，溶解后还要调节PH值，再分装到锥形瓶中．
（2）配制好的培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌后，待培养基冷却到50℃左右倒平板．等待平板冷却凝固（大约需5～10min）后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，防止水蒸气凝结的小水滴污染培养基．
（3）系列稀释操作中，依次将1mL液体移人下一个盛有9mL蒸馏水的试管中，使浓度正好为原来的十分之一．
微生物接种方法主要有（稀释）涂布（抹）平板法和平板划线法，过程a所用的接种方法为（稀释）涂布平板法．
（4）根据题图估算自来水中大肠杆菌的菌落数是3÷0.1×10³×10³=3×10⁷个/L，超标1000万倍．
（5）由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此估算的菌落数少于实际菌落数．
故答案为：
（1）琼脂    蛋白胨     PH    
（2）高压蒸汽灭菌    倒过来（倒置）
（3）9   （稀释）涂布平板法     
（4）1000
（5）多     当两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上观察的是一个菌落

点评 本题考查了微生物的培养和数量测定的相关内容，意在考查学生的应用和实验探究能力，试题难度一般．