Question

【题目】重组人纤溶酶原激活剂（rhPA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品。家兔具有多胎、妊娠期短、繁殖快、全年多发情，产仔率高等优点，可以作为乳腺生物反应器批量生产药物。下图是利用转基因兔生产重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的过程，请据图回答。

（1）构建rhPA基因表达载体需要用限制酶_________切割质粒和目的基因，为获得乳腺特异性表达载体需用_____________酶切割重组质粒使之线性化。

（2）对母兔注射_________使其超速排卵，并与正常公兔配种。将乳腺特异性表达载体导人家兔受精卵中最有效的导入技术是____________。

（3）将受精卵置于37℃的_______________气体环境中培养一段时间后移植到代孕兔的输卵管中，代孕兔需经___________处理。

（4）子代兔需要经过筛选过程才能获得生产人组织纤溶酶原激活剂的生物反应器，原因有____________、____________。

Answer 1

【答案】 XhoⅠ SalⅠ和NotⅠ 促性腺激素 显微注射技术 95%空气和5%C02 同期发情（孕激素） 只有部分子代兔导入了人组织纤溶酶原激活剂基因 公兔不能表达人组织纤溶酶原激活剂

【解析】试题分析：熟记并理解基因工程的基本操作程序及其应用、胚胎移植、动物细胞培养等相关的基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上，结合问题情境，从题图和题意中提取有效信息进行相关问题的解答。

(1)分析图示可知：构建rhPA基因表达载体时，目的基因（rhPA基因）插入到了质粒上的XhoⅠ酶切位点的下方，说明是用限制酶XhoⅠ切割的质粒和目的基因的。依据乳腺特异性表达载体的组成可知：为获得乳腺特异性表达载体，使重组质粒线性化，需用SalⅠ和NotⅠ酶进行切割。

(2)对母兔注射促性腺激素使其超速排卵，并与正常公兔配种。将乳腺特异性表达载体导入家兔受精卵中，常采用的最有效的导入技术是显微注射技术。

(3) 将受精卵置于37℃的95%空气和5%C02气体环境中培养一段时间后，移植到经同期发情（孕激素）处理的代孕兔的输卵管中，以使该受精卵继续发育为子代。

(4)由于只有部分子代兔导入了人组织纤溶酶原激活剂基因，而且公兔不能表达人组织纤溶酶原激活剂，所以子代兔需要经过筛选过程才能获得生产人组织纤溶酶原激活剂的生物反应器。