题目内容
【题目】他莫昔芬（Tamoxifen）是治疗乳腺癌的常用药物，然而长期服用容易引起耐药性。牛樟芝（AC）是一种传统的药用蘑菇提取物，科研人员用AC处理Tamoxifen抗性的乳腺癌细胞（MCF-7tamR），发现其可以缓解Tamoxifen的耐药性，相关研究如下，请回答问题：
（1）乳腺癌发生的根本原因是外界致癌因子引起了________突变。
（2）科研人员在不同条件下培养MCF-7tamR细胞，分别于24h、48h测定细胞增长率，结果如图1所示。
①体外培养MCF-7tamR细胞时，培养基中除水、糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子外，通常还需要加入______和抗生素；传代培养时，贴满瓶壁的细胞需要用_____等处理后分瓶继续培养。
②分析图1结果，依据__________，可知AC和Tamoxifen联合使用对于MCF-7tamR细胞的治疗效果最好。
（3）Skp2和RhoA是乳腺癌细胞中两种关键酶，前者抑制细胞凋亡，后者影响细胞代谢。两种酶是基因通过___________过程指导合成的蛋白质。
（4）为进一步探明AC的作用机理，研究人员从100μg/ml AC处理24h的MCF-7tamR细胞中获取mRNA，逆转录得到cDNA后，特异性扩增skp2和RhoA基因的片段，进行电泳检测。结果如图2所示。
①β-actin基因在不同细胞中转录水平相对稳定，且表达量较高，在实验中可消除______等无关变量对实验结果的影响，常用作参照基因。
②由实验结果可知，AC抑制了细胞中Skp2、RhoA基因的_______过程。据此推测AC的作用机制可能是__________。
【答案】原癌基因和抑癌基因 血清 胰蛋白酶 联合使用AC和Tamoxifen时的细胞增长率，比单独使用AC和Tamoxifen时低 转录和翻译 检测方法 转录 抑制Skp2、RhoA基因表达，促进MCF-7 tamR细胞凋亡，影响细胞代谢
【解析】
根据题意，AC可缓解Tamoxifen的耐药性，根据表格中数据，比较Tamoxifen组、AC100μg/ml组、AC100μg/ml+Tamoxifen组对细胞增长率的影响，24h和48h的细胞增长率为：Tamoxifen组﹥AC100μg/ml组﹥AC100μg/ml+Tamoxifen组；比较Tamoxifen组、AC150μg/ml组、AC150μg/ml+Tamoxifen组对细胞增长率的影响，24h细胞增长率为：Tamoxifen组﹥AC150μg/ml组≈AC150μg/ml+Tamoxifen组；48h细胞增长率为：Tamoxifen组﹥AC150μg/ml组﹥AC150μg/ml+Tamoxifen组；且48h细胞增长率AC100μg/ml+Tamoxifen组﹥AC150μg/ml+Tamoxifen组，说明施加AC确可缓解Tamoxifen的耐药性且该效应与浓度有关，据此分析。
（1）乳腺癌发生的根本原因是外界致癌因子引起了原癌基因和抑癌基因突变。
（2）①体外培养MCF-7tamR细胞时，培养基中除水、糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子外，通常还需要加入血清和抗生素；传代培养时，贴满瓶壁的细胞需要用胰蛋白酶等处理后分瓶继续培养。
②分析图1结果，联合使用AC和Tamoxifen时的细胞增长率，比单独使用AC和Tamoxifen时低，说明AC和Tamoxifen联合使用对于MCF-7tamR细胞的治疗效果最好。
（3）Skp2和RhoA是乳腺癌细胞中两种关键酶，前者抑制细胞凋亡，后者影响细胞代谢。两种酶是基因通过转录和翻译过程指导合成的蛋白质。
（4）①β-actin基因在不同组细胞中转录水平相对稳定，且表达量较高，在实验中可消除检测方法等无关变量对实验结果的影响，常用作参照基因。
②由实验结果可知，AC组细胞扩增出的Skp2、RhoA基因片段几乎没有，说明未获取得到相关mRNA，推测AC抑制了细胞中Skp2、RhoA基因的转录过程。据此推测AC的作用机制可能是抑制Skp2、RhoA基因表达，从而促进MCF-7 tamR细胞凋亡，从而影响细胞代谢。
