题目内容
【题目】科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体，利用载体将荧光素酶基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程：
（1）利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为（5'-CAACA·········AAAAC- 3'）和（5' -CAAGT·········TCCCC-3'）。
两种引物的碱基序列分别与_____________互补，且引物必须具有一定长度（如15一30个左右碱基），以确保_______________________。
（2）切割慢病毒载体DNA，用___________酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。用重组载体去感染人淋巴瘤细胞，最终获得能稳定表达荧光素酶的淋巴瘤细胞。对获得的淋巴瘤细胞进行培养，培养温度应为_________，需要的气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是__________________。
（3）通过统计细胞数量，比较含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（甲）和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（乙）的生长情况，结果如图（a)，据图可看出这两种细胞生长趋势基本相似，说明________________；再分别取第5、6、7、8、9、10代的含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞，加人荧光素酶底物，检测荧光强度，结果如图（b），说明____________________。
（4）将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠（无胸腺）体内，通过检测_________，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。
【答案】与目的基因两条链的特定片段 引物会特异性识别目的基因的特定片段（引物的特异性） DNA连接 37℃ 维持培养液的PH 荧光素酶基因的表达不影响淋巴瘤细胞生长 荧光素酶基因能在细胞生长分裂过程中稳定表达 荧光强度
【解析】
基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
（1）利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为（5'-CAACA·········AAAAC- 3'）和（5' -CAAGT·········TCCCC-3'）。两种引物的碱基序列分别与目的基因两条链的特定片段互补，为确保引物会特异性识别目的基因的特定片段（引物的特异性），设计的引物必须具有一定长度（如15～30个左右碱基）。
（2）用限制性内切酶切割慢病毒载体DNA，用DNA连接酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。细胞培养的所需的温度为37℃，需要的气体主要有O2和CO2，利用CO2来维持培养液的PH。
（3）据图（a)可以看出，含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（甲）和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（乙）的生长趋势基本相似，说明荧光素酶基因的表达不影响淋巴瘤细胞生长；据图（b)可以看出，在细胞生长分裂过程中，荧光素酶基因产生的荧光素酶与荧光素酶底物，荧光强度保持不变，说明荧光素酶基因能在细胞生长分裂过程中稳定表达。
（4）将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠（无胸腺）体内，通过检测荧光强度，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。
