Question

【题目】临床实验表明，服用乳酸菌及其制品具有减少人体血清胆固醇含量、降低心脑血管发病率的功效。下面是从酸奶中筛选出高效降低胆固醇的乳酸菌的实验，请回答下列问题：

（1）甲、乙两位同学为测定某一酸奶样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：

实验者	平板菌落数
	A	B	C	D
甲同学	110	140	149	133
乙同学	27	169	176	124

两位同学的计数结果中，______同学的结果可信度低，其原因是_________________。

（2）为获取纯种乳酸菌，将少量酸奶制成梯度稀释液，将其中稀释到的稀释液涂布于添加了碳酸钙的乳酸菌培养基（MRS培养基）平板上，在_____（填“有氧”或“无氧”）条件下37℃恒温培养72h。挑取有_______的菌落，用_______法接种在MRS斜面培养基上保藏备用。

（3）为获得能高效降低胆固醇的乳酸菌菌株，在普通的MRS液体培养基中添加适量_________并用超声波振荡乳化20min，调pH至7.0，然后将斜面培养基上保藏的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后加入特定显色剂，离心，用_____法测定上清液中胆固醇的含量，以_________________________作为对照，测定菌株降低胆固醇的能力，筛选出目的菌株。

Answer 1

【答案】乙 乙同学的结果中，有一个平板的计数结果与另两个相差悬殊，结果的重复性差 无氧 溶钙圈（或透明圈） 划线 高胆固醇 光电比色 未接种的高胆固醇培养液

【解析】

（1）利用稀释涂布平板法对微生物计数，要注意稀释倍数的选取，为了保证结果准确，通常选择菌落数在30～300之间的平板进行计数。（2）利用溶钙圈法对乳酸菌进行筛选的原理是乳酸菌产生的酸性物质和CaCO3反应而出现溶钙圈。（3）通过实验获得能高效降低胆固醇的乳酸菌菌株，自变量是加入高胆固醇的普通的MRS液体培养液中是否接种乳酸菌菌株，因变量是培养液中胆固醇的含量，可以采用光电比色法测定。

(1) 表中信息显示：乙同学的结果中，有一个平板的计数结果与另两个相差悬殊，结果的重复性差，说明乙同学的结果可信度低。

(2) 乳酸菌属于厌氧菌，因此需要在无氧条件下培养。乳酸菌产生的乳酸和MRS培养基中的CaCO3反应而出现溶钙圈。可见，为获取纯种乳酸菌，应挑取有溶钙圈的菌落，而后将该菌落用平板划线法接种在MRS斜面培养基上保藏备用。

(3) 为获得能高效降低胆固醇的乳酸菌菌株，在普通的MRS液体培养基中应添加适量的高胆固醇并用超声波振荡乳化20min，调pH至7.0，然后将斜面培养基上保藏的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养。一段时间后加入特定显色剂，离心，用光电比色法测定上清液中胆固醇的含量，以未接种的高胆固醇培养液作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。