题目内容
【题目】骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A(TSA)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制,为临床治疗寻找新方向。实验过程如下:
步骤1 用含青霉素和链霉素的高糖培养基,在37℃、5% CO2培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。
步骤2 取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞,用加入不同浓度的TSA(0~200
ng·mL-1)的培养基继续培养24h。
步骤3 对各组细胞进行抽样检测,检测方法是先用台盼蓝试剂(一种细胞活性染料)染色再用血细胞计数板计数,统计细胞存活率(未染色细胞数/细胞总数×100%),结果如图1。
步骤4 分别提取TSA浓度为0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1处理的3组细胞,测量细胞中与凋亡相关的基因(Bax、Bcl-2)和β-肌动蛋白基因(不同的组织细胞中表达相对恒定)表达的蛋白质量并计算比值,结果如图2。
分析回答:
(1)与正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移,其主要原因是 。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是 ,细胞培养箱中保持5% CO2的作用是 。
(2)步骤2中,设置0 ng·mL-1 TSA实验的主要目的是 。
(3)用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是 。
(4)图1所示结果表明 。
(5)根据图2判断,骨肉瘤细胞中 基因过度表达会加速细胞凋亡。
【答案】(1)骨肉瘤细胞膜上的糖蛋白等物质减少 防止杂菌污染 维持培养液pH
(2)排除非测试因素对实验结果的影响
(3)活细胞的细胞膜具有选择透过性,台盼蓝不能进入活细胞内(死细胞膜失去选择透过性,台盼蓝能进入死细胞内)
(4)TSA浓度越高对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用越强
(5)Bax
【解析】
(1)骨肉瘤细胞属于癌细胞,癌细胞细胞膜上的糖蛋白等物质减少,细胞容易在体内分散和转移。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的防止杂菌污染。细胞培养箱中保持5% CO2的作用是维持培养液pH。
(2)0 ng·mL-1 TSA实验组为对照组,排除除试验因素以为非测试因素对实验结果的影响。
(3)活细胞的细胞膜具有选择透过性,台盼蓝不能进入活细胞内,而死细胞膜失去选择透过性,台盼蓝能进入死细胞内,这样,活细胞不会染成颜色,而死细胞会出现蓝色,从而可以统计出细胞死亡个数。
(4)TSA浓度越高,细胞存活率越低,细胞死亡数越多,说明TSA浓度越高对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用越强。
(5)TSA浓度越高,培养液中的Bax蛋白更多, Bax蛋白由Bax基因表达,因此说明骨肉瘤细胞中Bax基因过度表达出Bax蛋白,会加速细胞凋亡。
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