题目内容
【题目】随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因测序工作的完成,人类跨入了蛋白质时代。对蛋白质进行研究和应用,首先需要获得高纯度的蛋白质。请回答下列问题:
(1)蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、_____、_____和纯度鉴定。
(2)凝胶色谱法:是根据_______________的有效方法.所用凝胶的化学本质大多为____________。SDS﹣聚丙烯酰胺凝胶电泳消除了净电荷对迁移率的影响,使电泳迁移率完全取决于_____。
(3)粗分离中透析的目的是________,若要尽快达到理想的透析效果,可以_______。
(4)装填凝胶色谱柱时,凝胶必须装填紧密,原因是_____________________,色谱柱制作成功的标志是__________________。
【答案】粗分离 纯化 相对分子质量的大小分离蛋白质 多糖类化合物 分子的大小 去除相对分子质量较小的杂质 及时更换缓冲液或增加缓冲液的量 如果凝胶装填得不够紧密、均匀,就会在色谱柱内形成无效的空隙,使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过,搅乱洗脱液的流动次序,影响分离的效果 红色区带均匀一致的移动
【解析】
血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步,包括:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液,即样品的处理;再经过透析去除分子量较小的杂质,即样品的粗分离;然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去,即样品的纯化;最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
(1)血红蛋白的提取和分离的程序可分为四大步,包括:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
(2)样品纯化是通过凝胶色谱法(分配色谱法)去掉分子量较大的杂质。凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法,相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程长,移动的速度慢,相对分子质量较大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道,路程短,移动的速度快。
(3)血红蛋白溶液的粗分离采用的方法是透析,即将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析,去掉分子量较小的杂质,原理是小分子杂质可以通过透析袋进入缓冲液中,血红蛋白分子量较大,不能通过透析袋进入缓冲溶液。若要尽快达到理想的透析效果,可以及时更换缓冲液或增加缓冲液的量。
(4)如果凝胶装填得不够紧密、均匀,就会在色谱柱内形成无效的空隙,使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过,搅乱洗脱液的流动次序,影响分离的效果,因此,装填凝胶色谱柱时,凝胶必须装填紧密。色谱柱制作成功的标志是:红色区带均匀一致的移动。