题目内容
【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
(1)Rag2基因表达的场所最可能在___________(填写器官)
(2)步骤②中，重组胚胎培养到___________期时，可从___________分离出ES细胞。
(3)步骤③中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以利用___________扩增Rag2基因片段。用 HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________和___________的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______________________，用___________进行杂交实验。
【答案】骨髓或胸腺 囊胚 内细胞团 pcr 技术 HindⅢ PstⅠ 蛋白质 Rag2蛋白的抗体
【解析】
图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。
1、动物核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。
2、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）。
3、在基因工程中，目的基因和质粒需要用同种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接成重组质粒。
4、目的基因分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术。
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术。
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。
（1）Rag2基因表达的场所最可能在骨髓或胸腺。
（2）内细胞团位于囊胚中，所以步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。
（3）步骤③中，利用pcr技术扩增Rag2基因片段。基因工程中构建基因表达载体时，应用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，若用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段，则为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。
（4）为检测Rag2基因的表达情况，可采用抗原-抗体杂交法，即提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质（抗原），用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
