Question

【题目】（银负载二氧化钛）作为一种常见的半导体光催化剂，在可见光照射下不仅可杀灭饮用水中的细菌等微生物，降解水中的有机化合物，还能循环利用，因此被广泛使用。某研究小组制备了空心微球悬浊液，现欲探究不同载银量的空心微球的杀菌性能。回答下列问题：

（1）培养大肠杆菌：制备适宜大肠杆菌生长的培养基，将培养皿、培养基等置于________中灭菌20min；在无菌环境中倒平板，待平板冷凝后，将平板倒置，是为了________；将大肠杆菌制备成菌悬液，分离纯化。

（2）杀菌性能检测：挑取菌落制成菌悬液，用________（工具）接种于无菌平板表面，使其均匀生长，布满平板；将浸透了________的小滤纸片（实验组）和浸透了________的小滤纸片（空白对照），分别放在涂布好的平板的不同位置；将平板置于恒温箱中培养一段时间，观察记录________。

（3）测定饮用水所含的大肠杆菌数目，还有一种特别的方法：将已知体积的饮用水过滤后，将________放在加入________的培养基上（大肠杆菌菌落呈黑色），根据黑色菌落的数目，可计算出水样中大肠杆菌的数量。这种计数方法较实际值有误差的原因是________。

Answer 1

【答案】高压蒸汽灭菌锅 防止皿盖上的冷凝水滴落，污染培养基 涂布器 不同载银量的空心微球悬浊液 （等量）无菌水 滤纸片周围抑菌圈（透明圈）大小（直径） 滤膜 伊红美蓝 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

【解析】

1、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、滤膜法是检测水样中大肠细菌群的方法。将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的大肠菌群数。操作简单、快速，主要适用于杂质较少的水样

（1）制备适宜大肠杆菌生长的培养基时，培养皿与培养基常置于高压蒸汽灭菌锅20min；倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，还能促进培养基表面水分的挥发。

（2）液体菌种进行稀释涂布平板法接种时需要用涂布器。为防止培养基污染，用浸透了不同载银量的Ag/TiO2空心微球悬浊液的小滤纸片作为实验组和浸透了等量无菌水的小滤纸片作为空白对照，分别放在涂好菌的平板的不同位置；将平板置于恒温箱中培养一段时间，观察记录滤纸片周围抑菌圈（透明圈）大小（直径）。

（3）伊红美蓝指示剂是鉴别大肠杆菌的指示剂，在测定饮用水所含的大肠杆菌数目时，将已知体积的饮用水过滤后，将滤膜放在加入伊红美蓝的培养基上，大肠杆菌菌落的颜色为具有金属光泽的黑色。用稀释涂布平板法的迹象微生物计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以此计数方法较实际值较低。