题目内容
【题目】在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答：
(1)A过程需要的酶有： 。
(2)将目的基因导入植物体细胞除了上述农杆菌转化法之外，还可用 法（任填一种）；可用 技术检测转基抗虫棉是否成功表达出Bt毒蛋白；除抗虫基因外，基因表达载体中还必须包含的部分是 （至少写出两点）。
(3)由外植体培养为转基因植株的D、E过程分别为 ，该过程的理论基础是
。
(4)已知BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如图所示：
用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后，和 序列将明显增多。
【答案】（1）限制酶、DNA连接酶
(2)基因枪法（花粉管通道法） 抗原抗体杂交 启动子、终止子、标记基因（写两个）
(3)脱分化、再分化 细胞全能性 （4）
【解析】（1）A过程表示构建基因表达载体，此过程需要先用同种限制酶处理质粒和含有抗虫基因的外源DNA分子以产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶将切割好的质粒和目的基因连接形成重组DNA分子。
（2）将目的基因导入植物体细胞除了上述农杆菌转化法之外，还可用基因枪法或花粉管通道法；可以抗原-抗体杂交技术目的基因是否表达；除抗虫基因外，基因表达载体中还必须包含启动子、终止子、标记基因等部分。
（3）由外植体培养为转基因植株的过程需要用到植物组织培养技术，所以D、E过程分别为脱分化、再分化；该过程的理论基础是细胞全能性。
（4）根据题图和题意可知，BamHⅠ切割后形成的黏性末端是
，BgIⅡ切割后形成的黏性末端是
。由于两种限制酶切割形成的黏性末端相同，因此黏性末端的连接方式有四种：两种自身黏性末端连接、两种黏性末端互连。由于两种自身连接形成的序列仍然可以被这两种限制酶切割，而两种黏性末端互连形成的序列这两种限制酶无法再识别切割，因此若干循环之后和这两种序列将明显增多。
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