题目内容
【题目】甘露聚糖酶是分解纤维素的重要酶。该酶大量存在于土壤纤维素分解菌中。现采用基因工程方法将甘露聚糖酶基因导入动物肠道酵母菌中，以帮助动物消化纤维素。请回答：
（1）从土壤纤维素分解菌中获得甘露聚糖酶，通过分析该酶的__________序列，优先选择酵母菌偏爱的密码子，找到相对应的__________序列，通过__________（填方法名称）法合成甘露聚糖酶基因。
（2）甘露聚糖酶基因与质粒进行连接构建表达载体，表达载体中甘露聚糖酶基因应位于_________之间才能表达，表达载体还需加入一些调控元件，将该工程的表达载体构建为分泌型表达载体而非胞内型表达载体，目的是__________。
（3）通过电击方法将表达载体转化到处于_______的酵母细胞，经检测转化成功的酵母细胞不存在环状DNA，可初步推测导入的表达载体已整合到酵母细胞的__________上。
（4）获得的甘露聚糖酶需要与天然的甘露聚糖酶进行__________比较。
【答案】氨基酸 脱氧核苷酸 人工化学合成法 启动子和终止子 使转基因的酵母细胞合成的甘露聚糖酶能够分泌到动物肠道中 感受态 染色体 功能活性
【解析】
基因工程的基本操作程序：
1、目的基因的获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。
2、基因表达载体的构建：
3、将目的基因导入受体细胞常用的转化方法：常用方法有农杆菌转化法、显微注射技术、Ca2+处理法。
4、目的基因的检测和表达：
（1）甘露聚糖酶的本质是蛋白质，所以需要分析酶的氨基酸序列，找到可相应的脱氧核苷酸序列，通过人工化学合成法合成目基因。
（2）目的基因应位于启动子和终止子之间才能表达；该基因工程改造的是动物肠道的酵母菌，让转基因的酵母菌能够分泌甘露聚糖酶帮助动物消化纤维素，所以为了使转基因的酵母细胞合成的甘露聚糖酶能够分泌到动物肠道，必须构建为分泌型表达载体。
（3）将目的基因导入微生物，微生物必须处于易于接受周围DNA的状态（感受态），如果化成功的酵母细胞不存在环状DNA，可初步推测导入的表达载体已整合到酵母细胞的染色体上。
（4）有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较，以确定转基因产品的功能活性是否与天然产品相同。
【题目】牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用十分广泛的天然培养基，多数微生物能够在该培养基上生长。牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成如表所示。请回答下列有关问题：。
物质 | 用量 | 物质 | 用量 |
牛肉膏 | 5g | 琼脂 | 20g |
蛋白胨 | 10g | 水 | 定容至1000mL |
NaCl | 5g |
（1）按物理状态划分，该培养基属于____________培养基。上述培养基配方中提供碳源的物质是_____________。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、_________以及氧气的要求。
（2）获得纯净培养物的关键是______________________。接种环使用前后要进行___________灭菌。
（3）该培养基________（填能或不能）用于土壤中纤维素分解菌的筛选，原因是__________________________________________。
【题目】鸸鹋油提取自澳洲动物鸸鹋（一种当地常见鸟类）的背部脂肪，具有很多用途，如促进伤口愈合，缓解关节炎等，也常与一些抗菌成分混合制成抗菌药物，近年来受到研究人员的关注。
（1）随着抗菌药物被广泛使用，病原菌的抗药性基因频率发生___________（填“定向”或“不定向”）改变，人们迫切希望发现新结构的抗菌化合物。
（2）前期研究发现鸸鹋油的水溶性较差，所以不能在___________培养基上出现清晰的抑菌圈，故将醇鹊油与乙醇和Tween 80（一种乳化剂）混合均匀制成乳液。为确定鸸鹋油的最小抑菌浓度（MIC），研究人员进行了以下实验：
①将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌分别___________到LB培养基中，在37℃摇床条件下培养。摇床振荡培养的原因是___________。
②一段时间后将上述培养基稀释为一定浓度的菌悬液，加入不同稀释浓度的鸸鹋油乳液并振荡混匀，培养20 h后测定菌体的存活状况，结果如下表。
鸸鹋油浓度/% | 菌体生长情况 | ||
大肠杆菌 | 金黄色葡萄球菌 | 沙门氏菌 | |
0 | + | + | + |
0．00156 | + | + | + |
0．00313 | + | + | + |
0．00625 | - | + | + |
0．0125 | - | - | + |
0．025 | - | - | + |
0．05 | - | - | + |
注：“+”表示有菌生长；“-”表示无菌生长。
上述结果显示：_______________。
（3）常见抗菌药物霉素的抗菌机理是抑制细菌细胞壁的合成。有人提出鸸鹋油可增大菌体细胞膜的通透性。已知多数细菌体内存在β—半乳糖苷酶，可催化乳糖水解生成_________________和半乳糖，邻硝基酚-β半乳糖苷（ONPG）是一种乳糖类似物，可进入菌体，被β-半乳糖苷酶水解为邻硝基苯酚（一种黄色物质）。分光光度计可定量检测溶液中某种物质的含量。为确定鹊油能否增大菌体细胞膜通透性，请你根据上述原理写出实验思路____________。