题目内容

【题目】下面是某同学制作果酒和果醋的实验流程图以及分离土壤中能分解尿素的细菌的培养基配方。请回答有关问题:

KH2PO4

Na2HPO4

MgSO47H2O

蛋白胨

葡萄糖

尿素

琼脂

1.4g

2. 1g

0.2g

1.0g

10.0g

1.0g

15.0g

预分离土壤中能分解尿素的细菌的培养基配方

(1)图中方框内应该填写的实验步骤是___________,此步骤中起主要作用的微生物是___________,其发酵时___________(填“需要”或“不需要”)氧气,适宜的发酵温度范围是___________

(2)根据培养基的成分判断,该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?___________(填“能”或“不能”),原因是_________________________________

(3)如果想进一步对初步筛选得到的菌株进行纯化并计数,可采用的接种方法是_________________。通常鉴定分解尿素的细菌的方法是在培养基中加入___________指示剂。

【答案】醋酸发酵(或果醋发酵)醋酸菌需要30~35℃不能培养基中的氮源还有蛋白胨(尿素不是唯一氮源),不能选择出只以尿素为氮源的微生物稀释涂布平板法酚红

【解析】

由题文的描述和图表分析可知:该题考查学生对果酒与果醋的制作、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数等相关知识的识记和理解能力。

(1)题图显示:通过图中方框内的实验步骤后,得到了果醋,因此图中方框内应该填写的实验步骤是醋酸发酵(或果醋发酵)。在果醋发酵中,起主要作用的微生物是醋酸菌。醋酸菌是好氧菌,所以发酵时需要氧气。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃,所以在果醋的制作过程中,需将培养温度控制在30~35℃范围内。

(2)从土壤中分离出分解尿素的细菌,应以尿素为唯一氮源,而该培养基配方中的氮源,除了尿素外,还有蛋白胨,即尿素不是唯一氮源,所以该同学不能从土壤中分离出分解尿素的细菌。

(3) 对初步筛选得到的菌株进行纯化并计数,可采用稀释涂布平板法对该菌株进行接种。在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,氨会使培养基的pH升高,酚红指示剂将变红,因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,即可初步鉴定所培养的细菌是否可以分解尿素。

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草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒(GCRV)引起的,目前尚未找到防治药物。下图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接,并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图。图中P10和PH为启动子,箭头表示转录方向。PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因(DNA片段)。请回答下列问题:

草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表

组别

疫苗注射量

实验鱼数

死亡鱼数

死亡率

免疫保护率

1

10μg

20尾

0尾

0

100%

2

30μg

20尾

0尾

0

100%

3

60μg

20尾

1尾

5%

95%

空载体

30μg

20尾

6尾

30%

70%

对照

0

20尾

20尾

100%

0

(1制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗,获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增,该技术除需要原料、模板、_____________外,还必须用____________酶。PCR一般要经历三十次以上的循环,每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段,其中变性是指____________条件下,DNA分子____________的过程。

(2)使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因,是为了防止____________,用不同限制酶先后两次切割质粒,是为了防止____________,有利于提高核酸疫苗构建的成功率。

(3)攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内,通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白,使草鱼生成抗体和记忆细胞,同时给草鱼注入相同浓度的GCRV,我,统计草鱼免疫保护率,实验结果说明____________。导入空载体(普通质粒)的草鱼免疫保护率达到70%,但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加,可能的原因是________________________。核酸疫苗注射后,科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达,至第49天核酸疫苗仍没有被降解,仍能检测到PV7双基因的转录。综上所述,与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比,核酸疫苗所具备的优点有________________________

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