题目内容
【题目】我国拥有自主知识产权的Bt毒蛋白抗虫棉，某水稻研究中心尝试运用农杆菌转导法培育Bt毒蛋白抗虫水稻，其过程如图所示。回答下列问题：
（1）一般情况下单子叶植物不能利用农杆菌转导法，原因是______________。科学家在添加乙酰丁香酮后，可利用农杆菌将目的基因导入水稻的愈伤组织中，水稻幼胚愈伤组织在基因工程中是作为___________。
（2）获取Bt毒蛋白基因后可利用_________技术扩增Bt毒蛋白基因。表达载体除了Bt毒蛋白基因、潮霉素磷酸转移酶基因（可抗潮霉素）外，还必须有__________。
（3）要将表达载体转入农杆菌内，需用________处理农杆菌，使之成为感受态细胞。要获取幼胚愈伤组织，在培养基中除一定的营养物质以外，还需要___________。
（4）为了检测水稻的DNA上是否插入了Bt毒蛋白基因，需要使用DNA探针做标记进行DNA分子杂交，该DNA探针由_________________组成。
（5）若要验证该转基因水稻是否具有抗虫性，需进行__________________________。
【答案】农杆菌对单子叶植物无感染能力 受体细胞 PCR 启动子 终止子 Ca2+ 激素 用放射性同位素标记Bt毒蛋白基因 抗虫的接种实验，检测抗虫性
【解析】
基因工程的基本操作程序
1、目的基因的获取：（1）原核基因采取直接分离获得；（2）真核基因是人工合成；（3）PCR技术扩增目的基因；
2、基因表达载体的构建；
3、将目的基因导入受体细胞。
常用的转化方法：
（1）将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。
（2）将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵．
（3）将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用 Ca2+处理细胞，使其成为 感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
4、目的基因的检测和表达
（1）由于农杆菌对单子叶植物没有感染力，所以一般情况下单子叶植物不能利用农杆菌转导法，水稻幼胚愈伤组织在基因工程中作为受体细胞接受目的基因。
（2）目的基因的扩增可用PCR技术，表达的载体组成是目的基因+启动子+终止子+标记基因，Bt毒蛋白基因是目的基因、潮霉素磷酸转移酶基因是标记基因，所以还需要启动子和终止子。
（3）要将细菌处理成感受态细胞，需要用Ca2+，处理微生物，愈伤组织的培养，除了一定的营养物质以外，还需要植物激素（生长素和细胞分裂素）。
（4）DNA探针做标记进行DNA分子杂交的原理是碱基互补配对，所以探针是用放射性同位素标记Bt毒蛋白基因。
（5）验证该转基因水稻是否具有抗虫性，需要进行抗虫的接种实验，检测抗虫性。
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