题目内容

【题目】（1）用限制酶BamHI和BclI（识别序列和切割位点如图A所示）联合切开长度为2.8kb（1 kb = 1000对碱基）的pul基因，并将之与BamHI打开的质粒（如图B所示）粘连拼接，那么所获得的重组质粒（每个质粒分子含单个pul基因）用BamHI和EcoRI联合酶切，可产生长度分别为__________kb的片段或者长度分别为________________kb的片段。

（2）上述重组质粒与大肠杆菌受体细胞混合进行导入操作，之后还需要筛选，这是因为_________________________________________________。

（3）上述含重组质粒的大肠杆菌细胞进行大规模培养可获得普鲁兰酶产品，在工业化应用之前可先进行提纯及固定化处理，这个过程在生物工程中称为___________，其目的和原理是___________（填下列选项）。

A．使普鲁兰酶不溶于水，因为支链淀粉不溶于水

B．使普鲁兰酶重复使用，因为酶在反应前后性质不变

C．使普鲁兰酶更趋稳定，因为蛋白质固定化后不易被降解

D．使普鲁兰酶活性更高，因为蛋白结构在固定化后往往会改变

【答案】1.4、6.8 kb 4.0、4.2 kb 重组质粒导入概率很低 酶工程 B

【解析】

限制酶BamHI和BclI切开pul基因，BamHI打开的质粒，连接的时候存在两种情况，正接和反接。且由图A可知，BclI切开的黏性末端与BamHI打开的黏性末端的连接产物不能在被限制酶BamHI识别。故重组质粒有两种，5.4（含BamHI和EcoRI酶切位点）+2.8或者是4.0+（1.4+2.8）（BamHI和EcoRI酶切位点）。

（1）根据以上分析可知，用BamHI和EcoRI联合酶切，可产生长度分别为1.4kb、5.4-1.4+2.8=6.8kb的片段或者长度分别为5.4-1.4=4.0kb、2.8+1.4=4.2kb的的片段。

（2）上述重组质粒与大肠杆菌受体细胞混合进行导入操作，之后还需要筛选，这是因为重组质粒导入成功的概率很低。

（3）上述含重组质粒的大肠杆菌细胞进行大规模培养可获得普鲁兰酶产品，在工业化应用之前可先进行提纯及固定化处理，这个过程在生物工程中称为酶工程，其目的和原理是使普鲁兰酶重复使用，因为酶在反应前后性质不变，故选B。

练习册系列答案
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