题目内容
【题目】回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与果酒及果醋的制作有关的问题：
（1）在筛选纯净的酵母菌菌种时，为了更容易得到单菌落，常用_________方法。扩大培养时，使用的培养基是_________（填“固体”或“液体”）培养基，并需要提供_________（填“有氧”或“无氧”）条件。
（2）酒精发酵装置中弯曲的安全玻璃管可以让瓶中的二氧化碳气体排出，还可以_________。为了制作酒精含量较高（体积分数约为15%）、糖含量也较高的葡萄酒，可以向果汁中加入适量_________。
（3）果醋发酵过程中，随着发酵的进行，乙醇含量逐渐下降，这是由于醋杆菌在_________和酸性环境下将乙醇氧化为醋酸。醋杆菌产生的醋酸可使培养液中的pH值最低达到_________。
A.2-3 B.3-4 C.4-5 D.5-6
（二）根据以下叙述回答有关的问题：
基因敲除是针对某个序列己知但功能未知的基因，改变其基因结构，令该基因功能丧失，从而对生物体造成影响，进而推测出该基因功能的一门技术。以下是制备基因敲除小鼠的过程示意图。
请回答：
（1）为了获得目的基因，可以用_______或者PCR扩增法。构建基因敲除载体时需要的工具酶有_______。
（2）为了得到胚胎干细胞，可以用_________消化胚胎组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个胚胎细胞悬浮液，然后进行原代培养和传代培养。也可以直接将胚胎组织从机体中取出后立即进行细胞、组织培养，当细胞从组织块中迁移出来，形成_________并增大后，再传代培养。
（3）将囊胚移植到代孕母鼠体内后，其外表的一层扁平细胞，将来会发育为_________。生产出的一只嵌合体小鼠与野生型小鼠杂交后（假设子代足够多）_________（一定、不一定）能得到杂合子基因敲除小鼠。基因敲除技术具有广阔的应用前景，请举一例_________。
【答案】 涂布分离法 液体 有氧 减少氧气和杂菌进入 蔗糖 有氧（充氧） A 化学方法合成 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 胰蛋白酶 生长晕 胚胎附属结构或者胚外结构 不一定 建立人类疾病的转基因动物模型，为医学研究提供材料；改造动物基因型，鉴定新基因和/或其新功能，研究发育生物学；治疗遗传病，这包括去除多余基因或修饰改造原有异常基因以达到治疗的目的；改造生物、培育新的生物品种
【解析】试题分析：本题考查微生物培养、分离、果酒和果醋的制作、基因工程、细胞工程和胚胎工程。
（一）（1）在筛选纯净的酵母菌菌种时，涂布分离法更容易得到单菌落。液体培养基中菌体与营养物质接触更充分，且酵母菌有氧呼吸可以提供更多的能量，因此扩大培养时，应使用液体培养基，并需要提供有氧条件。
（2）酒精发酵装置中弯曲的安全玻璃管可以减少氧气和杂菌进入。制作酒精含量较高（体积分数约为15%）、糖含量也较高的葡萄酒，可以向果汁中加入适量蔗糖。
（3）醋杆菌属于需氧菌，果醋发酵过程中，醋杆菌在有氧和酸性环境下将乙醇氧化为醋酸，所以随着发酵的进行，乙醇含量逐渐下降。醋杆菌产生的醋酸可使培养液中的pH值最低达到2-3。
（二）（1）目的基因序列己知，获得目的基因，可以用化学方法合成或者PCR扩增法。构建基因敲除载体时需要用限制性核酸内切酶和DNA连接酶。
（2）为得到胚胎干细胞，可用胰蛋白酶消化胚胎组织，获得单个胚胎细胞悬浮液。也可以直接将胚胎组织从机体中取出后立即进行细胞、组织培养，当细胞从组织块中迁移出来，形成生长晕并增大后，再传代培养。
（3）将囊胚移植到代孕母鼠体内后，其外表的一层扁平细胞为滋养层细胞，将来会发育为胚胎附属结构或者胚外结构。由于嵌合体小鼠生殖器官中不一定含有基因敲除细胞，与野生型小鼠杂交后不一定能得到杂合子基因敲除小鼠。基因敲除技术可以用于建立人类疾病的转基因动物模型，为医学研究提供材料；可以改造动物基因型，鉴定新基因和/或其新功能，研究发育生物学；可以治疗遗传病，包括去除多余基因或修饰改造原有异常基因以达到治疗的目的；可以改造生物、培育新的生物品种。
