题目内容
【题目】水中细菌总数可以作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。在水质卫生学检验中，细菌总数是指1mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，经37℃、24h培养后，所生长出的菌菌落数。为初步测定某处池水中的细菌数目，实验的大致流程为：
回答下列问题：
（1）对采集的池水进行梯度稀释时，应先将1mL水样加入___________中以获得稀释10倍的稀释液。实验中对采集的池水要进行稀释的原因是___________________________。
（2）接种培养所用到培养基中，能为细菌同时提供碳源和氮源的物质是_________________________。
（3）为保证菌落计数结果准确，一般选择菌落数在__________的平板进行计数。用这种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低，原因是____________________________。
（4）实验过程中为确保培养基上菌落来自所采集水样，避免杂菌污染。实验中需要注意的具体操作有____________________________（至少答2点）。
【答案】 9ml无菌水 避免池水中细菌数目过多（密度过大），得不到单菌落 牛肉膏、蛋白胨 30—300 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 采集水样的容器要灭菌，稀释和接种要在酒精灯火焰旁等
【解析】试题分析：题中只需要水中的细菌数目，不需要进行鉴定，微生物培养中，对活菌计数常用稀释涂布平板法，除此之外计数方法还有显微镜直接计数法。
（1）对池水进行稀释时，为了减少误差，所用必须为无菌水，1ml水样稀释10倍，则加9ml无菌水；池水中细菌数目过多，在进行涂布培养时不容易获得单个菌落，使计数误差较大。
（2）稀释后的水样接种在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中培养，牛肉膏、蛋白胨均含有蛋白质、糖类等有机物，故其能为细菌同时提供碳源和氮源的物质是牛肉膏、蛋白胨。
（3）为保证菌落计数结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板进行计数。稀释涂布平板法计数一般都会偏低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（4）为避免杂菌污染，必须严格按照无菌技术，实验者、操作台消毒处理；所用容器均需灭菌；整个实验过程需要在酒精灯火焰旁进行等。
