Question

【题目】如图所示为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。复制原点是在基因组上复制起始的一段序列。1kb＝1000个碱基对长度。请据图回答问题：

（1）图中获得目的基因的方法为_____。

（2）片段D为目的基因中的某一片段，有关叙述正确的是_____。

A．若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子

B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用中①处

C．若只用这片段中的3个碱基对，可以排列出43种片段

D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基

E．同一条脱氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间依次经过脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖

（3）已知UGA为终止密码。据图判断，转录的终止位点最可能在图示目的基因中片段D的_____（左/右）侧。

（4）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是_____（A/B/C），请据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由是_____。

（5）用EcoR I完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度为1.1kb和_____ kb，或者_____kb和_____kb的片段。 （重组质粒上目的基因的插入位点与EcoR I的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

Answer 1

【答案】生物体细胞中分离或（由限制酶内切得到） BDE 右侧 B 质粒A缺少标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制 5.6 3.1 3.6

【解析】

基因工程的工具：限制酶、DNA连接酶、运载体。
基因工程的操作步骤：目的基因的获取、构建基因表达载体、把目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。
含ApR、TcR的细胞表达后对氨苄青霉素、四环素存在抗性；lacZ为蓝色显色基因，故含有完整lacZ的细胞会显示蓝色，不含lacZ的细胞会显示白色。
D中①氢键、②脱氧核糖与磷酸基团之间的化学键。

（1）图中含有目的基因的DNA片段是从生物体细胞中分离出来的，因此获得目的基因的方法是从生物体细胞中分离。

（2）A、密码子是mRNA上决定一个氨基酸的3个相邻的碱基，若图中的ACT能决定一个氨基酸，则其对应的密码子是UGA，A错误；

B、DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②磷酸二酯键处，解旋酶作用中①氢键处，B正确；

C．A和T之间有2个氢键，C和G之间有3个氢键，因此若只用这片段中的3个碱基对，可以排列出23种片段，C错误；

D．就游离的磷酸基而言，该片段有2个游离的磷酸基，而重组质粒不含游离的磷酸基，因此该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基，D正确；

E．同一条脱氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间依次经过脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖，E正确。

故选BDE。

（3）转录的终止位点即终止子，位于基因编码区的下游，最可能在图示目的基因中片段D的右侧。

（4）图中质粒A缺少标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制。因此，能作为目的基因运载体最理想的质粒是B。

（5）目的基因和质粒B形成的重组质粒长度为2.7﹣0.1+（4.0﹣1.0）＝5.6kb（质粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的大片段）、0.1+1.0＝1.1kb（质粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因时形成的小片段）或2.7﹣0.1+1.0＝3.6（质粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的小片段）、0.1+3.0＝3.1（质粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因时形成的大片段）。