Question

【题目】某同学欲从土壤中筛选能够分解纤维素的细菌，请回答以下问题：

（1）在筛选具有分解纤维素能力的细菌时，应将土壤样品用____________________进行稀释，然后接种到以____________为唯一碳源的培养基上。

（2）采用____________法对初步筛选到的菌株进行纯化。

（3）对纯化的菌种再采用____________方法进行鉴定。

（4）若将稀释105倍的上述纤维素分解菌菌液，用直接计数法和稀铎涂布平板法进行计数。

①直接计数法：用吸管吸取0.1ml该菌液，滴于血球计数板上的盖玻片边缘，待该细菌全部沉降到计数室底部，用显微镜直接计数，并计算出每升菌液的细菌数目。

②稀释涂布平板法计数：在五个固体培养基上分别接种O.lmL该细菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，培养基上的菌落数分别为：40、152、154、156，则每升菌液中细菌数量为_________个。

③正常操作情况下，上述两种计数法中，_________统计获得的细菌数量数目目偏多，原因是_________。

Answer 1

【答案】 无菌水 纤维素 稀释涂布平板法或平板划线法 刚果红染色法 1.26×1011 直接计数法 直接计数法无论菌休死活均被计数，而稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

【解析】本题考查微生物的选择培养、微生物计数等知识，要求考生掌握无菌操作技术，掌握筛选纤维素分解菌的方法，能利用直接计数法和稀释涂布平板法计数微生物，并比较两种计数法的差异。

（1）在筛选具有分解纤维素能力的细菌时，应将土壤样品用无菌水进行稀释，以防止混入其他杂菌，然后接种到以纤维素为唯一碳源的培养基上。

（2）采用稀释涂布平板法或平板划线法都可以对初步筛选到的菌株进行纯化。

（3）对纯化的菌种再采用刚果红染色法方法进行鉴定，若培养基中出现透明圈，则说明透明圈中存在具有分解纤维素能力的细菌。

（4）若将稀释105倍的上述纤维素分解菌菌液，用直接计数法和稀铎涂布平板法进行计数。①直接计数法：用吸管吸取0.1ml该菌液，滴于血球计数板上的盖玻片边缘，待该细菌全部沉降到计数室底部，用显微镜直接计数，并计算出每升菌液的细菌数目。②稀释涂布平板法计数：在五个固体培养基上分别接种O.lmL该细菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，培养基上的菌落数分别为：40、152、154、156，故每升菌液中细菌数量为（40+152+154+156）40.1x1000x105=1.26x1011个。③正常操作情况下，上述两种计数法中，直接计数法统计获得的细菌数量数目目偏多，原因是直接计数法无论菌体死活均被计数，而稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。