题目内容
【题目】回答下列(一)、(二)小题：
（一）回答与生物技术在食品加工中应用有关的问题：
（1）制作苹果醋的具体流程如图所示：
①图中乙过程可加入适量的果胶酶和果胶甲酯酶；为鉴定获得的果汁是否含有果胶，可加入适量的________________。丙过程为适宜条件下进行酒精发酵，发酵完成的标志是________________。
②若用于醋酸发酵的醋杆菌被杂菌污染，欲消除污染的杂菌，可通过划线分离法获得________________，然后进行扩大培养，常用的培养基是_________。
A．MS培养基 B．LB平面培养基
C．添加蔗糖的豆芽汁 D．含蛋白胨、酵母提取物、甘露醇的培养液
（2）发酵制作泡菜时，利用的微生物是从________________（天然/人工培养）中获得；在发酵过程中微生物利用菜中的________________进行发酵产生有机酸和醇类物质等，同时还会产生一定量的亚硝酸。可以用光电比色法定量测定亚硝酸盐，在对样品处理过程中加入硫酸锌和氢氧化钠溶液的作用是________________；进行样品测定时，用光程为1cm的比色杯在550nm处测定OD值，若测定的OD值偏大可采取的措施是________________。
（二）回答与抗虫棉培育有关的问题：
（1）土壤农杆菌中的野生Ti质粒能诱导肿瘤形成，但分子量太大，且缺乏可利用的单一________________酶位点，所以需对野生型Ti质粒进行改造。改造过程除了要切除致瘤基因外，还必须保留一段控制质粒DNA________________的基因。同时还要将抗虫基因转入到质粒的T-DNA区，获得含目的基因的重组Ti质粒。下列关于改造过程的叙述错误的是________________
A．去除T-DNA区的激素基因，因为激素基因产物会导致植物转化细胞内激素不平衡而无限分裂，阻止正常植株的再生
B．在去除的激素基因的T-DNA区增加至少一个可以在植物体内表达的标记基因，这样便于转化细胞易于被检测出来
C．在T-DNA区添加一个可以克隆外源目的基因的多聚接口，便于目的基因的克隆。
D．改造后含目的基因的重组Ti质粒可以通过土壤农杆菌胞内寄生而进入植物细胞，从而Ti质粒整个整合到植物遗传物质中
（2）含重组Ti质粒的农杆菌导入植物细胞：人为地在植株上造成创伤，然后把含重组质粒的农杆菌接种在创伤面上，使农杆菌在植物体内进行侵染实现转化的目的。为了获得较高的转化率，一般采用无菌种子的实生苗或者试管苗。农杆菌接种后，受伤部位一般________________（会、不会）出现肿瘤。在筛选转化细胞时，可将感染部位的薄壁组织切下放入选择培养基上进行筛选和愈伤组织的诱导。最后将转化的愈伤组织转移至________________培养基上诱导丛状苗，再生根诱导出再生植株。
（3）抗虫棉植物的检测：可对成体植株进行________________实验检测。
（4）多途径的植物克隆：通过植物组织培养可以培养大量的试管苗，扩大抗虫棉的种植面积；通过大量培养特定的________________，实现了能产生重要次生代谢产物（如抗虫蛋白）的细胞的大量克隆和产物的工业化生产；通过________________，进行单倍体克隆等。
【答案】乙醇 发酵瓶中停止产生气泡 单菌落 D 天然 糖和其他营养物质 沉淀析出蛋白质等杂质 对样品溶液进行适当的稀释 限制性核酸内切 转移 D 不会 生芽（或发芽） 棉铃虫感染 细胞系 花药（花粉）培养
【解析】
1、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，条件是30～35℃、一直需氧；果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
2、泡菜的制作所使用的微生物是乳酸菌，代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬菜中的葡萄糖氧化为乳酸。泡菜中的亚硝酸盐含量可以用比色法测定，即在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，重氮盐与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
3、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。
（一）（1）①为了鉴定获得的果汁是否含有果胶，可加入适量的乙醇；酒精发酵利用的是酵母菌的无氧呼吸，完成的标志是发酵瓶中停止产生气泡。
②若用于醋酸发酵的醋杆菌被杂菌污染，欲消除污染的杂菌，可通过划线分离法获得单菌落；醋酸菌是一种细菌，其发酵可以产生醋酸，对其进行扩大培养，应该用含蛋白胨、酵母提取物、甘露醇的培养液，故选D。
（2）发酵制作泡菜时，利用的菌种是天然获得的；发酵过程中微生物利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵产生有机酸和醇类物质等，同时还会产生一定量的亚硝酸；在利用光电比色法定量测定亚硝酸盐时，对样品处理过程中加入硫酸锌和氢氧化钠溶液的目的是沉淀析出蛋白质等杂质；进行样品测定时，用光程为1cm的比色杯在550nm处测定OD值，若测定的OD值偏大，可以对样品溶液进行适当的稀释。
（二）（1）土壤农杆菌中的野生Ti质粒能诱导肿瘤形成，但分子量太大，且缺乏可利用的单一限制性核酸内切酶位点，所以需对野生型Ti质粒进行改造；改造过程中要切除致瘤基因，保留一段控制质粒DNA转移的基因。
A、由于激素基因产物会导致植物转化细胞内激素不平衡而无限分裂，阻止正常植株的再生，所以改造过程中应该去除T-DNA区的激素基因，A正确；
B、为了检测出转化细胞，应该在去除的激素基因的T-DNA区增加至少一个可以在植物体内表达的标记基因，B正确；
C、应该在T-DNA区添加一个可以克隆外源目的基因的多聚接口，便于目的基因的克隆，C正确；
D、改造后含目的基因的重组Ti质粒可以通过土壤农杆菌胞内寄生而进入植物细胞，但是Ti质粒不会整个整合到植物遗传物质中，D错误。
故选D。
（2）由于致瘤基因已经被切除，因此农杆菌接种后，受伤部位一般不会出现肿瘤；将转化的愈伤组织转移至生芽培养基上诱导丛状苗，再生根诱导出再生植株。
（3）对成体植株进行棉铃虫感染实验，可以对转基因抗虫棉进行个体水平的检测。
（4）通过大量培养特定的细胞系，实现了能产生重要次生代谢产物（如抗虫蛋白）的细胞的大量克隆和产物的工业化生产；通过花药（花粉）培养，进行单倍体克隆等。
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