题目内容
【题目】请回答下列关于固定化酶和细菌培养实验的问题：
（1）某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，分组见表。
组别 | 固定化酶柱长度（cm） | 淀粉溶液的流速（mL·min-1） |
甲 | 10 | 0.3 |
乙 | 10 | 0.5 |
丙 | 15 | 0.3 |
丁 | 15 | 0.5 |
将吸附了
-淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去_________________。按上表分组，将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行KI-I2检测，若流出液呈红色，表明有________________生成；若各组呈现的颜色有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是_____________组。
（2）下列关于上述固定化酶实验的叙述，错误的是_____________。
A.固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量
B.淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉
C.各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同
D.淀粉溶液的pH对实验结果有影响
（3）现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中的细菌数，进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用______________法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进行计数。该实验应注意，接种前，从盛有_____________的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_____________作为对照。
（4）在上述细菌培养实验中进行计数时，应计数的是接种了______________。
A.各个稀释度样品的培养基上的细菌数
B.合理稀释度样品的培养基上的细菌数
C.各个稀释度样品的培养基上的菌落数
D.合理稀释度样品的培养基上的菌落数
【答案】未吸附的α-淀粉酶 糊精 丙 A 涂布分离 70%酒精 未接种的培养基 D
【解析】
①分析表中信息：利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，自变量是固定化酶柱的长度、淀粉溶液的流速，因变量是淀粉的水解产物糊精，可利用糊精遇KI-I2溶液显红色的原理对因变量进行检测；实验过程中，淀粉溶液的浓度等无关变量应控制相同且适宜。α-淀粉酶的固定化过程中，由于α-淀粉酶不是100%地被吸附在石英砂上，因此需用蒸馏水洗去未吸附在石英砂上的α-淀粉酶。固定化酶柱越长、淀粉溶液流速越慢，酶促反应越彻底，生成的淀粉的水解产物越多。②对微生物进行计数，可采用涂布分离法进行接种，在操作过程中需防止杂菌污染。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。为了检测培养基灭菌是否合格，可随机取若干灭菌后的未接种的培养基作为对照。
（1）由于装入柱中的石英砂上含有未吸附的α-淀粉酶，所以需用蒸馏水充分洗涤，以免影响实验结果；淀粉酶催化淀粉水解生成糊精，糊精与KI-I2反应呈红色；酶与底物反应时间越长，产生的产物越多；丙组固定化酶柱最长、淀粉溶液的流速最慢，说明固定化酶与淀粉接触时间最长，淀粉水解产物的浓度最高。
（2）固定化酶柱长度和淀粉溶液的流速决定了酶与淀粉溶液反应的时间，不能决定酶柱中酶的含量，A错误；若淀粉溶液流速过快，则反应不充分，会使部分淀粉未进行反应即流出，B正确；根据实验设计的等量原则，四组实验所用的淀粉溶液浓度应相同，C正确；酶的活性受pH影响，D正确。
（3）对细菌进行计数时，应用涂布分离法对细菌进行接种，培养后根据菌落数进行计数；接种前玻璃刮刀需先用70%的酒精溶液进行消毒，然后放到酒精灯上灼烧灭菌；为排除培养基本身对实验结果的影响，应用未接种的培养基在相同条件下培养作为对照。
（4）若培养液稀释不充分，则接种后培养基上的菌落会连成一片，不宜计数，所以应选择合理稀释度样品的培养基进行计数，D项符合题意。
