题目内容
【题目】某生物兴趣小组进行有关血红蛋白提取和分离实验以及以a-淀粉酶为材料的实验，回答下列问题：
（1）提取血红蛋白宜选用哺乳动物成熟的红细胞为材料，原因是_____________。
（2）血红蛋白提取和分离般分为四步，即样品处理、_______、纯化和纯度鉴定。样品处理过程中共有___次离心。纯度鉴定方法中使用最多的是____________。
（3）血红蛋白分离过程中如果有气泡产生，则主要与下列哪项有关___ ( 填序号)。
①凝胶色谱柱的制作 ②色谱柱的装填 ③样品的处理
（4）使用凝胶色谱法分离a-淀粉酶、血红蛋白两种蛋白质，凝胶色谱法是根据____________分离蛋白质的有效方法。实验步骤：将含有a-淀粉酶、血红蛋白两种蛋白质的混合物加人装填了凝胶的玻璃管上端，用__________进行洗脱，检测其洗脱先后次序。
（5）该小组同学用琼脂作载体，用包埋法固定a-淀粉酶来探究固定化酶的催化效果。实验结果如下：（注：假设加入试管中的固定化淀粉酶量与普通a-淀粉酶量相同)
1号试管 | 2号试管 | |
固定化淀粉酶 | √ | |
普通α-淀粉酶 | √ | |
淀粉溶液 | √ | √ |
60℃保温5分钟，取出冷却至室温，滴加碘液 | ||
现象 | 变蓝 | 不变蓝 |
1号试管变蓝的原因是_____________________。
【答案】哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核和众多的细胞器 粗分离 2（2-5都可以） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ② 相对分子质量不同 磷酸缓冲溶液 淀粉是生物大分子，难以通过扩散与淀粉酶接触而导致反应无法进行
【解析】
血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定；首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
（1）哺乳动物成熟的红细胞没有没有细胞核和众多的细胞器，所以更好的获得血红蛋白。
（2）血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定；在样品处理中，红细胞的洗涤需要低速短时间离心3次，在分离血红蛋白过程中需要2000r/min离心10min，所以一共需要4次离心。纯度鉴定方法使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
（3）如果有气泡，可能是在装填凝胶色谱柱时不紧密导致。②正确。
（4）凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。在洗脱是用磷酸缓冲溶液。
（5）1号试管使用了固定化酶技术，所以变蓝的原因是淀粉是生物大分子，难以通过扩散与淀粉酶接触而导致反应无法进行。
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