题目内容
【题目】下图1表示含目的基因的DNA片段，图2表示质粒（巳知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种限制酶切割后产生的黏性末端都不相同）。请回答下列问题：
（1）已知DNA的合成方向总是从子链的5＇端向3＇端延伸。利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增目的基因，需要的引物有______________(从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。上述过程中，经过__________次循环后会产生双链等长的目的基因片段。
（2）要保证目的基因能与图2中的质粒连接，要将（2）中选出的两种引物的5＇端分别添加上________两种限制酶的识别序列。在此基础上，对扩增的目的基因和质粒都用这两种限制酶处理，待基因表达载体构建完成后，加入到含大肠杆菌的转化液中。要从中分离出含该重组质粒的大肠杆菌单菌落，请简述操作思路将转化液接种在__________的固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间后，___________。
（3）从DNA分子结构分析，上述操作用到的工具酶作用的共同点是______________。
【答案】 B、C 3 PstⅠ、EcoRⅠ 加入四环素 观察是否有菌落生长 都作用于磷酸二酯键，（但不作用氢键）
【解析】DNA是由反向平行的两条链构成，子链合时，由子链的5＇端向3＇端延伸，要想使目的基因与质粒结合，目的基因的两端加上与质粒一样的限制酶序列。
（1）已知DNA的合成方向总是从子链的5＇端向3＇端延伸，由图1可知子链的5＇对应的引物分别是B、C。
由图可知第三轮复制会产生双链等长的目的基因片段。
（2）图2中有三种限制酶切点，其中PstⅠ、EcoRⅠ切割抗青霉素基因，HindⅢ切割的是抗四环素基因，为了保证重组质粒至少有一个标记基因，所以在两种引物的5＇端分别添加上选择PstⅠ、EcoRⅠ这两种限制酶识别的序列，重组质粒中含有四环素抗性基因，所以在含有四环素的培养基上筛选重组大肠杆菌，观察是否有菌落生长。
（3）基因工程中用到的是限制酶和DNA连接酶，这两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。
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