题目内容
【题目】纳豆和腐乳都是豆类发酵品，用纳豆杆菌发酵大豆制作纳豆的流程原理与腐乳的制作相似。纳豆杆菌能分泌纳豆激酶等。回答下列问题
（1）纳豆制作的原理是___________________________。
（2）纳豆激酶能够水解血栓中水不溶性的纤维蛋白，所以具有溶解血栓的作用。纳豆杆菌的筛选和分离常用到由磷酸盐缓冲液、纤维蛋白和琼脂配制而成的乳白色的纤维蛋白培养基。从培养基营养组成的角度来看，其中的纤维蛋白的作用是__________________________。
若培养基上出现_________________________，说明含有纳豆杆菌。
（3）提纯纳豆激酶可用于制备药物。为提取纯化纳豆激酶，可进行下列实验：
①接种具有高纤溶活性的菌落到液体发酵培养基。37℃，摇床振荡，发酵3天。
②收集发酵液，离心，分层，取_____________作为提取纳豆激酶的材料。
③透析法分离：将上述离心所得样品装人透析袋，置于25mmo/L磷酸盐缓冲液中透析，以便达到__________________________的目的。
④凝胶色谱纯化：将透析液进行柱层析，用____________进行洗脱，试管连续收集。
⑤为了确认试管收集液中是否含有纳豆激酶，还要__________________________。
【答案】纳豆杆菌等微生物分泌的蛋白酶能将豆类中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸 充当碳源和氮源，提供能源物质 （较大）溶解圈 上清液 去除/置换样品中分子量较小的杂质 （25mmol/L）磷酸（盐）缓冲液 添加适量收集液到纤维蛋白培养基上（或添加适量收集液到含有血栓的溶液里）
【解析】
1、腐乳的制作原理：以豆腐为原料利用毛霉等微生物分泌出各种酶，促使豆腐坯中的蛋白质分解成营养价值高的氨基酸和一些风味物质。有些氨基酸本身就有一定的鲜味，腐乳在发酵过程中也促使豆腐坯中的淀粉转化成酒精和有机酸，同时还有辅料中的酒及香料也参与作用，共同生成了带有香味的酯类及其他一些风味成分，从而构成了腐乳所特有的风味。腐乳在制作过程中发酵，蛋白酶和附着在菌皮上的细菌慢慢地渗入到豆腐坯的内部，逐渐将蛋白质分解，大约经过三个月至半年的时间，松酥细腻的腐乳就做好了，滋味也变得质地细腻、鲜美适口。
2、培养基的成分包括：碳源、氮源、无机盐和水，有的需要生长因子等。碳源分为无机碳源和有机碳源，无机碳源如二氧化碳，有机碳源如葡萄糖，碳源是构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质；氮源分为无机氮源（铵盐、硝酸盐等）和有机氮源（尿素、牛肉膏等），合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。
3、血红蛋白的提取和分离：（1）样品处理：洗涤，用生理盐水洗涤，低速离心，直至上清液中没有黄色；（2）血红蛋白释放：加入蒸馏水和甲苯，细胞破碎释放血红蛋白；（3）分离：低速离心，分成4层，第三层红色透明液体为血红蛋白水溶液层，分出该层；（4）透析：放入透析袋，出去分子量较小的杂质；（5）过凝胶色谱柱收集纯蛋白。
（1）根据题意可知，用纳豆杆菌发酵大豆制作纳豆的流程原理与腐乳的制作相似，因此纳豆制作的原理是：利用纳豆杆菌等微生物分泌的蛋白酶能将豆类中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
（2）根据培养基的成分可知，纤维蛋白既含有碳元素也含有氮元素，因此可以作为碳源和氮源使用，提供能源物质，由于纳豆杆菌能分泌纳豆激酶，纳豆激酶能够水解水不溶性的纤维蛋白，在乳白色的固体培养基上如果存在纳豆杆菌，则可以在培养基上形成较大的溶解圈。
（3）纳豆激酶的化学本质属于蛋白质，因此提纯纳豆激酶的方法即提纯蛋白质的方法。实验步骤：
①接种具有高纤溶活性的菌落到液体发酵培养基。37℃，摇床振荡，发酵3天。
②收集发酵液，离心，分层，取上清液作为提取纳豆激酶的材料。
③透析法分离：将上述离心所得样品装人透析袋，置于25mmo/L磷酸盐缓冲液中透析，透析的目的是去除/置换样品中分子量较小的杂质。
④凝胶色谱纯化：将透析液进行柱层析，用25mmo/L磷酸盐缓冲液进行洗脱，试管连续收集。
⑤为了确认试管收集液中是否含有纳豆激酶，还要添加适量收集液到纤维蛋白培养基上，观察是否出现溶解圈。
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