题目内容
【题目】嗜热土壤芽孢杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，利用大肠杆菌表达BglB酶，开展了以下试验。（图中启动子与RNA聚合酶结合，终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列）
（1）______扩增bglB基因时，选用嗜热土壤芽孢杆菌基因组DNA作模板。
（2）如图为质粒限制性核酸内切酶切图谱，为使获得的bglB基因与质粒载体连接，bglB基因两端需分别含有______和______不同限制酶的识别序列
（3）将重组DNA分子导入受体细胞，为了促进该过程，应该用氯化钙处理大肠杆菌，其目的是______。
（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为______。
（5）下列有关限制性核酸内切酶的叙述中正确的是______
A．用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有2个
B．限制性核酸内切酶识别的序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大
C．-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸内切酶切出的粘性末端碱基数不同
D．只有用相同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒
【答案】PCR NdeⅠ BamHⅠ 增加大肠杆菌细胞壁的通透性 转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶 B
【解析】
基因工程的一般步骤：提取目的基因；目的基因与运载体结合；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和表达。
（1）PCR技术可在体外大量扩增目的基因。
（2）图中质粒上有多个限制性核酸内切酶的切割位点，但用PstⅠ切割会破坏抗生素抗性基因（标记基因），用KpnⅠ切割会破坏复制原点，用XbaⅠ切割会去除终止子，用EcoRⅠ切割会破坏终止子，用HindⅠ切割会破坏启动子，为使获得的bglB基因与质粒载体连接，为了防止目的基因和运载体自身环化，应该用两种限制酶切割，则bglB基因两端需分别含有NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列。
（3）将重组DNA分子导入受体细胞，为了促进该过程，应该用氯化钙处理大肠杆菌，其目的是增加大肠杆菌细胞壁的通透性，是大肠杆菌处于感受态。
（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶。
（5）A、用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有4个，A错误；
B、限制性核酸内切酶识别的序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大，B正确；
C、-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸内切酶切出的粘性末端碱基数相同，都是4个，C错误；
D、用不同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，也能形成重组质粒，D错误
【题目】下图表示细胞融合技术的一些过程。阅读下列材料，并简要回答下列问题。
抗生素 | 浓度 （μg/ml） | 抗性 | |
I菌 | JD菌 | ||
庆大霉素 | 3 | － | － |
利福平 | 3 | － | ＋ |
卡那霉素 | 3 | ＋ | － |
红霉素 | 3 | － | ＋ |
(注“十”代表有抗性，“-”代表无抗性）
材料一:近年来，细胞工程已进入高速发展阶段，已经成为生物学领域中一颗耀眼的明星。该工程可
在细胞水平或细胞器水平上，按照人们的意愿获得新型生物或特种细胞产品。
材料二：微生物采油的关键技术是获得性能优异的菌种，应用原生质体融合技术将两种微生物进行
融合，构建耐中高温采油微生物引起了科学家的广泛关注。宋绍富等人选用细菌I和细菌JD先后
进行了各自抗生素抗性以及融合实验的相关研究。研究发现，I菌与JD菌对不同抗生素的抗性是
不同的，测量结果见上表。
（1）上图中，若A细胞和B细胞均为植物细胞，细胞融合完成的标志是________ ；形成的D细胞还要应用_______________技术将其培养成植株。
（2）上图中，若A细胞和B细胞均为动物细胞，与植物细胞融合相比，从A细胞和B细胞到C细胞的过程中，____________________是诱导动物细胞融合特有的诱导因素，该过程说明了细胞膜具有____________。
（3）利用I菌和JD菌进行细胞融合时，首先应使用____________________法去除菌体的细胞壁，将获取______________________的保存在等渗溶液中待用。
（4）在对I菌和JD菌融合后的融合子进行筛选时，比较理想的是在培养基中添加3μg/ml红霉素（或3μg/ml利福平）与___________两种抗生素，此种培养基称为____________培养基。
