Question

【题目】阅读相关信息，完成微生物的培养及应用。

（1）将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：

①M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有___________（答出两点即可）。氮源进入细菌后，可参与合成的生物大分子有___________（答出两点即可）。

②若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶的微生物，加入的显色剂是___________，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理___________。

（2）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

①在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________________为唯一碳源的固体培养基土，从功能上讲，该培养基属于___________培养基。

②纯化菌种时，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是______________。该方法统计的菌落数往往比实际数目_________，这是因为_________。

Answer 1

【答案】碳源、无机盐 蛋白质、核酸 碘液 淀粉遇碘显蓝色，产淀粉酶菌落周围淀粉被水解，形成透明圈 原油 选择 稀释涂布平板法 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察得到的只是一个菌落

【解析】

1.测定培养液中微生物的数目，可采用显微镜直接计数(或血细胞计数板计数)法对培养液中的微生物直接计数，也可用稀释涂布平板法将微生物接种于灭菌后的固体培养基上，培养一段时间后，通过计数菌落数目计算培养液中微生物的数目。由于采用第一种方法计数时不能剔除死菌，采用第二种方法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以第一种方法统计的数目比实际活菌数目高，第二种方法统计的数目比实际活菌数目低。

2.选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。

（1）①微生物所需的营养物质有：碳源、氮源、水、无机盐等。而马铃薯浸出液能为微生物生长提供多种营养物质如氮源、碳源、无机盐等。生物体内的有机物中，蛋白质主要由C、H、O、N组成，部分含有P、S；核酸由C、H、O、N、P组成；磷脂由C、H、O、N、P组成，因此，氮源进入细胞后，可以参与合成蛋白质、核酸、磷脂等。

②淀粉遇碘液变蓝色，能产生淀粉酶的微生物可以分解细胞周围的淀粉，存在透明圈，从而容易筛选出产淀粉酶的微生物，因此为了筛选出分解淀粉的微生物，可在M培养基中用淀粉取代蔗糖，然后加入碘液为显色剂，接种土壤浸出液后进行培养，然后选择有透明圈的菌落即可。

（2）①在筛选过程中，应将从富含原油的地方获得的土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的固体培养基上，在该培养基上只有能够利用原油的微生物能够生长，而其他的微生物被抑制生长，因此，从功能上讲，该培养基属于选择培养基。

②因为不仅要对目标菌进行纯化，而且还有计数，因此需要采用稀释涂布平板法进行接种。用该方法统计时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察得到的只是一个菌落，因此在计数菌落时，往往比实际数目偏小。