题目内容
【题目】研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索。下图是对标记基因（绿色荧光蛋白基因，用GFP表示） 和N基因的酶切过程。请据图分析回答下列问题：
（1）切割基因时选用不同限制酶的目的是_______。切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP—N融合基因（以下称融合基因），该融合基因的上游基因为______________。
（2）若用质粒做运载体，需用图中的______酶切割质粒。在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为________。
（3）将融合基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞，融合基因表达载体进入ES细胞的方式为_______________。用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有________现象的ES细胞转染了融合基因。
（4）ES细胞在功能上具有___________，当培养在________上时，细胞只分裂不分化。将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行____________，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗。
【答案】（1）防止基因自身环化和不正确的连接 N基因
（2）KanⅠ、XbaⅠ 启动子和终止子
（3）胞吞 绿色荧光
（4）发育的全能性 饲养层细胞 分裂、分化
【解析】
试题分析：（1）切割基因时选用不同限制酶的目的是：保证目的基因和质粒的定向连接，防止基因自身环化和不正确的连接。题图显示：GFP基因的左侧（上游）与N基因的右侧（下游）均有EcoRI的酶切位点，经酶切后产生的黏性末端相同，据此可知由切割完成后的两基因连接成的GFP—N融合基因，其上游基因为N基因。
（2）若用质粒做运载体，为保证融合基因不被破坏，需用图中的KanⅠ、XbaⅠ酶切割质粒。位于基因首端的启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。位于基因尾端的终止子可起到终止转录在作用，所以在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为启动子和终止子。
（3）依题意可知：融合基因表达载体进入ES细胞的方式为胞吞。若ES细胞成功转染了融合基因，则融合基因中的GFP基因的表达产物会使ES细胞发出绿色荧光，因此用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有绿色荧光现象的ES细胞转染了融合基因。
（4）ES细胞在功能上具有发育的全能性，当培养在饲养层细胞上时，细胞只分裂不分化。将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行分裂、分化，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗。
