Question

【题目】为了解决番木瓜环斑病毒引起番木瓜产量下降问题，我国研发了抗番木瓜环斑病毒转基因番木瓜品种。下图表示该抗番木瓜环斑病毒转基因番木瓜的主要培育流程，请回答下列问题：

（1）番木瓜环斑病毒是一种变异性很强的RNA病毒。要想获得番木瓜环斑病毒复制酶基因，可先将番木瓜环斑病毒的RNA经过__________形成cDNA，再利用__________切割获得的双链cDNA来获取该病毒复制酶基因。

（2）在过程①的操作中，需要将番木瓜环斑病毒复制酶基因插入Ti质粒的__________，其原因是____________。在过程②的操作中，将重组Ti质粒转入大肠杆菌的目的是__________。

（3）给番木瓜细胞转入外来基因，成功的概率是很低的，可采用__________技术来检测愈伤组织中是否导入了外来基因。图中过程④和⑤中芽和根的分化与__________（填激素名称）有关。

Answer 1

【答案】逆转录 限制酶 T-DNA T-DNA可携带目的基因进入受体细胞，并整合到受体细胞的染色体 DNA上 大量复制目的基因 DNA分子杂交 生长素和细胞分裂素

【解析】

（1）考查基因工程育种的过程。图示过程中①为获得重组DNA的过程，该过程中需要限制酶和DNA连接酶、②为导入受体细胞的过程、③为将含有目的基因的番木瓜细胞进行组培的过程，表示其中的脱分化、④为再分化生出芽的过程、⑤为再分化生出根的过程。④与⑤的分化方向与培养基中生长素和细胞分裂素的比例有关。

（2）在分子水平上的检测目的基因有三种方法：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术，即C选项；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。

（1）因为番木瓜环斑病毒是一种RNA病毒。要想获得番木瓜环斑病毒复制酶基因，需先将番木瓜环斑病毒的RNA经过逆转录过程形成cDNA，再利用限制酶切割获得的双链cDNA来获取该病毒复制酶基因。

（2）在过程①的操作中，因为Ti质粒的T-DNA是可转移的DNA 所以需要将番木瓜环斑病毒复制酶基因插入其中，进而T-DNA可携带目的基因进入受体细胞，并整合到受体细胞的染色体 DNA上。因为大肠杆菌经常作为工程菌且易培养故在过程②的操作中，将重组Ti质粒转入大肠杆菌的目的是为了获得大量的目的基因，以便为后续的工作提供基础。

（3）据分析知：本题中检测目的基因是否成功导入采用DNA分子杂交技术来检测。过程④和⑤中芽和根的分化与生长素和细胞分裂素有关。