Question

【题目】环境污染物多聚联苯难以降解，受其污染的土壤中常有重金属污染同时存在。研究发现联苯降解菌内的联苯水解酶是催化多聚联苯降解的关键酶。回答下列问题：

（1）为了从富含多聚联苯的环境中分离联苯降解菌，培养基中加入多聚联苯作为______，该培养基属于______（填“选择”或“鉴定”）培养基。用平板划线法纯化该细菌时，第2次划线及其以后划线总是从上次划线的末端开始是为了______。

（2）为了能够反复利用联苯水解酶，可以采用______技术，该技术的另一个优点是______。

（3）若从联苯降解菌中分离并得到纯度较高的联苯水解酶，纯化该酶常用的方法是______，采用该方法先分离出分子质量______的蛋白质。

（4）如图实线表示联苯水解酶催化的反应速度与酶浓度关系，虚线表示在其他条件不变情况下，底物浓度增加一倍，反应速度与酶浓度的关系，能正确表示两者关系的是______

Answer 1

【答案】（唯一）碳源 选择 将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落 固定化酶 提高产物的纯度 凝胶色谱法 较大 B

【解析】

培养基根据用途分为：选择培养基、鉴别培养基。

常见的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、物理吸附法和化学结合法。

（1）为了从富含多聚联苯的环境中分离联苯降解菌，应该用以多聚联苯作为唯一碳源的选择培养基，只有联苯降解菌可以存活。用平板划线法纯化该细菌时，在进行第二次以及其后的划线操作时要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（2）为了能够反复利用联苯水解酶，可以采用固定化酶技术，该技术可使酶与产物分开，因此提高了产物的纯度。

（3）纯化该酶常用的方法是凝胶色谱法，该方法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此采用该方法先分离出分子质量较大的蛋白质。

（4）开始时，酶浓度较低，无论底物是否加倍都不能增加反应的速率；随着酶浓度增大，增加底物，反应速率会增加，故选B。