题目内容
【题目】采用微生物技术处理秸秆是当前研究最多的一种秸秆处理方法，而筛选具有高活性纤维素酶的秸秆降解微生物菌株以及相关研究是当前研究的热点和难点。研究人员从木材厂附近的腐烂朽木及土壤的特殊环境中筛选到一株产碱性纤维素酶的菌株LT3，并对其产酶条件进行了初步优化。具体实验如下：
取l g样品粉末置于无菌三角瓶（含30 mL富集培养基）中，25 ℃和220 r／min下，震荡培养48 h。取富集后的培养液按10-2、10-3、lO-4、1O-5、10-6配制不同梯度稀释液，分别涂布于平板中，28 ℃下恒温培养65 h后经刚果红染色得到菌落周围有明显透明水解圈的菌株，再接种于斜面培养基中25 ℃培养48 h，然后4 ℃低温保存。最后将得到的产纤维素酶菌株接种环到液体产酶培养基中发酵，测定初酶液的CMC酶活性和滤纸酶活性，最终以酶活性作为筛选纤维素酶高产菌的标准，筛选CMC酶活性和滤纸酶活性高的菌株。
请回答以下相关问题：
（1）使用以上纯化方法的目的是 。
（2）若在1O-5下分别移取0.1 mL涂布到3个平板中观察到26、240、280个菌落，则每克样品中含有的细菌数目为 个。
（3）恒温培养时，平板应倒置，原因是 。
（4）在加入刚果红染色后需加入1 mol/L的NaCl溶液，作用是 ，这种染色方法的弊端是 。
（5）若将LT3菌株于不同的pH的发酵培养基中30 ℃下震荡培养72 h，于酶活性鉴定板中观察其透明圈大小。结果如下表和图1：
表 pH对LT3菌株纤维素活性的影响
pH | 5.5 | 7.0 | 8.5 |
CMC酶活性（U/mL） | 12.30 | 13.49 | 12.36 |
图1 LT3菌株pH优化水解圈大小
由表和图1可以得出的结论是 。
（6）将LT3菌株接种到甘蔗渣为碳源的培养基中，30 ℃下震荡培养48 h、72 h、96 h、116 h、135 h，分别测定CMC酶活性和滤纸酶活性，结果如图2。
结果表明：LT3菌株同时获得较高CMC酶活性和滤纸酶活性的发酵时间为 h左右。
【答案】
（1）将聚集在一起的细菌分散成单个细胞，形成单菌落(2分)
（2）2.6×108
（3）既可使培养基表面水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染(2分)
（4）洗去多余的染液 不仅操作繁琐，而且往往使菌落之间发生混杂(2分)
（5）pH为7.0时透明圈最大，CMC酶活性最高
（6）120
【解析】
（1）根据题干，这是稀释涂布平板法进行纯化，目的是将聚集在一起的细菌分散成单个细胞，形成单菌落。（2）为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300个之间的平板进行计数，而且26和240、280差异过大，计算时应舍弃。再根据教材公式，该样品中含有的细菌数目=[（240+280）/（2×0.1）] ×105=2.6×108。（3）恒温培养时，平板应倒置的原因是既可使培养基表面水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
（4）在加入刚果红染色后需加入1 mol/L的NaCl溶液，其作用是洗去多余的染液，这种染色方法由于是培养后加刚果红染液，染色后要倒掉，再加NaCl洗去染液后再倒掉，这样不仅操作繁琐，而且往往使菌落之间发生混杂。
（5）由题图、表可知，pH为7.0时透明圈最大，CMC酶活性最高。（6）根据坐标曲线图，很容易得到LT3菌株同时获得较高CMC酶活性和滤纸酶活性的发酵时间为120 h左右。
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