Question

【题目】土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

实验步骤：

菌株	透明圈直径 （D）	菌落直径 （d）	D/d
M-3-01	18.8	12.3	1.5
B3-5-6	20.7	8.0	2.6
T1-4-01	9.1	6.5	1.4

步骤1 取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀

释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。

步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如表）。

分析回答：

（1）从物理形态看，培养基A属于_______培养基。培养基中磷源应该是______________。

（2）步骤1中接种方法是__________________，步骤2中接种环的灭菌方法是________。

（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_____________。

（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200 r·min-1 摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到图所示曲线。

①用摇床进行培养的好处是__________________________

②结果表明最优良的解磷菌株是_______________。

Answer 1

【答案】（1）固体 难溶性磷酸盐

（2）稀释涂布平板法 灼烧

（3）B3-5-6

（4）①增加培养液中的溶氧量；使菌株与培养液充分接触，有利于物质的交换（2分）

②M-3-01

【解析】

（1）菌落必需在固体培养基上才能形成（培养过程中菌体不能运动）；要筛选溶解难溶性磷能力强的菌株，必须以难溶性磷酸盐作为唯一磷源。

（2）步骤1的目的是从土壤微生物中筛选解磷微生物，由于土壤样液中微生物种类和数量多，因此，最好采用稀释涂布平板法进行接种（如果用平板划线法，则有可能不能将全部种类的微生物进行接种，当然本题步骤1中“取稀释液1mL接种”也暗示接种方法是稀释涂布平板法）。

（3）接种环灭菌方法是灼烧，涂布器的灭菌方法是先将涂布器浸入酒精中，再将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃

（4）根据实验原理中“透明圈直径与菌落直径比代表微生物溶解磷的能力大小”，结合表格数据可以确定解磷能力最强的菌株是B3-5-6。

（5）摇床培养是实验室培养需氧微生物的常用方法，使用摇床培养，不仅可以增大培养液中溶氧量，促进微生物的有机呼吸，而且能够增加菌体与培养液的接触，提高营养物质的利用率。

（6）根据实验曲线图，不难看出M-3-01实际溶解磷能力最强。