题目内容
【题目】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损．成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜．利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期．科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图．据图回答下列问题： 
（1）若已获取PG的mRNA，可通过方法获取PG基因．PCR技术扩增目的基因的前提是 ， 以便根据这一序列合成引物．
（2）该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7.5kb、1.5kb，则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是和 ．
（3）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有的培养基进行筛选．如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生，可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中，观察细胞现象进行判断．
（4）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达，使番茄果实的保质期延长．
【答案】
（1）逆转录法；有一段已知目的基因的核苷酸序列
（2）7.5kb；6.5kb
（3）卡那霉素；是否发生质壁分离
（4）天然的PG基因转录的mRNA（正常的mRNA）
【解析】解：（1）若已获取PG的mRNA，可通过逆转录法获取PG基因．PCR技术扩增目的基因的前提是有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．（2）该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7.5kb、1.5kb，则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是7.5kb和5+1.5=6.5kb．（3）由图可知，重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏，因此用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有卡那霉素的培养基进行筛选．之后，还需将其置于质量分数为0.3g/ml的蔗糖溶液中，观察细胞细胞是否发生质壁分离现象来鉴别细胞壁是否再生．（4）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与天然的PG基因转录的mRNA互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达． 所以答案是：（1）逆转录法；有一段已知目的基因的核苷酸序列；（2）7.5kb；6.5kb；（3）卡那霉素；是否发生质壁分离；（4）天然的PG基因转录的mRNA（正常的mRNA）
【考点精析】根据题目的已知条件，利用基因工程的原理及技术的相关知识可以得到问题的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．
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