Question

14．以下是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图．

（1）上图中过程①的完成采用的方法有：用聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒，依据的生物学原理细胞膜具有流动性；
（2）过程④要用到的酶有逆转录酶、DNA聚合酶，过程⑥采用的方法叫钙离子处理．
上图中的质粒本身含有氨苄青霉素抗性基因和M、N两种限制酶（两种酶切割序列完全不同）切割位点．若用限制酶M和N切割，通过凝胶电泳分离，分析得如下表．

分子量（kb）	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0	6.0	7.0	8.0	9.0	10.0
酶M	+				+					+
酶N							+		+
酶M+酶N	+	+	+	+		+
凝胶电泳结果（1kb=1000对碱基，+表示检测到该片段的存在

（3）该质粒长度为16kb，在该质粒中，M酶与N酶的切割点分别有3、2个．
（4）氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因（鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的受体细胞筛选出来）．
（5）在表达载体中，启动子的作用是：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动Ⅵ基因的转录．

Answer 1

分析 1、据图分析，细胞A表示效应B细胞，细胞Y表示杂交瘤细胞，结构甲表示基因表达载体，①过程表示动物细胞融合，②过程表示杂交瘤细胞的培养，③过程表示提取信使RNA，④过程表示逆转录，⑤表示基因表达载体的构建，⑥表示导入受体细胞．
2、分析表格和审清题意是解答本题的切入点．题干中提出，mtDNA是存在于人类细胞线粒体中双链闭合环状的DNA分子，因此限制酶在切割时，用酶M得到3个片段，则有3个切点，用酶N得到2个片段，则有2个切点．

解答 解：（1）上图中过程①过程表示动物细胞融合，采用的方法有：用聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒，依据的生物学原理细胞膜具有流动性；
（2）过程④表示逆转录，需要逆转录酶、DNA聚合酶，过程⑥将目的基因导入微生物采用的方法叫钙离子处理法．
（3）该mtDNA为环状DNA，用酶M得到3个片段，则有3个切点，用酶N得到2个片段，则有2个切点．用酶N切割得到2个片段的长度分别为7和9，则该mtDNA的长度为16Kb．
（4）氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因（鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的受体细胞筛选出来）．
（5）在表达载体中，启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动Ⅵ基因的转录．
故答案为：
（1）①用聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒   ②细胞膜具有流动性
（2）③逆转录酶、DNA聚合酶  ④钙离子处理
（3）⑤16   ⑥3  ⑦2
（4）⑧作为标记基因（鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的受体细胞筛选出来）
（5）⑨RNA聚合酶   ⑩转录

点评 本题结合图表，考查单克隆抗体的制备、基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各步骤的细节，能结合图中和表中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．