题目内容
【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G ↓ GATCC、↓GATC、CCC ↓GGG。 请回答下列问题:
(1)若用限制酶Sma I完全切割图1中DNA片段,其产物长度为____________________。
(2)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma I完全切割,产物中共有____种不同DNA片段。为了提高实验成功率,需要通过______________技术扩增目的基因,以获得大量的目的基因。
(3)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是______________。在导入重组质粒后,为了筛选出含质粒的大肠杆菌,一般先用添加_________的培养基
进行培养,然后将生长的菌接种到只含____________的培养基中培养,可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
(4)假设用BamH I切割DNA获取目的基因,用Mbo I切割质粒,然后形成重组质粒, 若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来,能否用BajnH I ? ___________。为什么?______________________。
【答案】(8分)
(1)533bp、794bp、661bp
(2)2 PCR
(3)BamH I 抗生素B 抗生素A
(4)不一定 因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC
【解析】(1)根据图1中的酶切位点,可判断用限制酶SmaⅠ完全切割该DNA片段,其产物长度为530+3=533bp、800-3-3=794bp、658+3=661bp。
(2)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,基因D就突变为基因d,那么基因d上只有一个限制酶SmaⅠ切割位点,被限制酶SmaⅠ切割的产物长度为534+796-3=1327kb、658+3=661bp,因此从隐性纯合子(dd)分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有2种不同DNA片段。为了提高试验成功率,需要通过PCR技术扩增目的基因,以获得大量的目的基因。
(3)由图1可知,目的基因两侧是GGATCC序列,该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列,因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒,应选用限制酶BamHⅠ切割。用限制酶BamHⅠ切割质粒后,用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因,但没有破环抗生素B抗性基因,因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌,能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌;再用含有抗生素A的培养基培养,能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌.最后能在培养皿1上生存,但不能在培养皿2上生存的大肠杆菌菌落进行培养,即可得到含重组质粒的大肠杆菌。
(4)若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来,不一定能用BajnH,因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC。