Question

【题目】为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行了如图1所示的实验。请据图回答：

（1）步骤③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是步骤③培养基中以_________为唯一碳源。从功能上讲，步骤③中使用的培养基属于________培养基。

（2）步骤④中使用的培养基中常常要加入________作为凝固剂；接种时，若在培养基表面连续进行4次划线（如图2），则需要对接种环灼烧________次。

（3）为了对石油分解菌进行计数，采用________法，得到了如图3所示的平板。运用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目________（填偏高或偏低）。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理后才能倒掉。若想要长期保存优质菌种，可以采用________的方法。

Answer 1

【答案】石油 选择 琼脂 5 稀释涂布分离 偏低 灭菌 甘油管藏

【解析】

从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。筛选菌株的过程要使用选择培养基，操作过程中要注意无菌操作，常用的固体培养基上接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。微生物计数可用稀释涂布平板法和血球计数板计数法。

（1）步骤③的培养基成分是筛选能分解石油的培养基，与普通液体培养基相比，最大的区别是步骤③培养基中以石油为唯一碳源。从功能上讲，步骤③中使用的培养基属于选择培养基，能分解石油的细菌能够生长，其它菌不能生长。

（2）步骤③中使用的培养基中常常要加入琼脂作为凝固剂。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，因此按照图中划线顺序进行4次划线，整个划线过程中需要对接种环进行灼烧的次数为5次。

（3）为了对石油分解菌进行计数，采用稀释涂布分离法，得到了如图3所示的平板。由于稀释难度大，常有菌落的重叠，运用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏低。

（4）实验结束后，为避免二次污染，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉。甘油管冷冻保藏法是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的，若想要长期保存优质菌种，可以采用甘油管藏的方法。