题目内容
【题目】虫草中的超氧化物歧化酶(SOD)具有抗衰老作用。研究人员培育了能合成SOD的转基因酵母菌。回答下列问题:
注:Hind Ⅲ和 ApaLⅠ是两种限制酶,箭头表示酶的切割位置。
(1)将图中的重组 DNA 分子用 Hind Ⅲ和 ApaLⅠ完全酶切后,可得到_______ 种 DNA 片段。 图示的表达载体存在氨苄青霉素抗性基因,不能导入用于食品生产的酵母菌中,据图分析,可用限制酶_____切除该抗性基因的部分片段使其失效,再用 DNA 连接酶使表达载体重新连接起来。
(2)作为受体细胞的酵母菌缺失 URA3 基因,必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活,因此,图示表达载体上的 URA3 基因可作为_____供鉴定和选择；为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌,所使用的培养基_____(填“需要”或“不需要”)添加尿嘧啶。
(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为_____。利用_____技术确定受体细胞中 SOD 基因是否转录。
【答案】3 ApaLI 标记基因 不需要 转化 分子杂交
【解析】
图示中的基因表达载体中有外源SOD基因（目的基因），Hind Ⅲ和 ApaLⅠ两种限制酶，氨苄青霉素抗性基因为标记基因，限制酶 ApaLⅠ会破坏标记基因。
(1)由于重组质粒上有1个 Hind Ⅲ和2个 ApaLⅠ的酶切位点，所以用Hind Ⅲ和 ApaLⅠ完全酶切后,可得到3种 DNA 片段。 根据图示信息可知，若让氨苄青霉素抗性基因失效,可用限制酶ApaLⅠ进行切割。
(2)作为受体细胞的酵母菌缺失 URA3 基因,必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活,因此,图示表达载体上的 URA3 基因可作为标记基因，供鉴定和选择；为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌,所使用的培养基不需要添加尿嘧啶。因为成功导入表达载体的酵母菌含有URA3 基因，可以在不含尿嘧啶的培养基中存活。
(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为转化。检测受体细胞中SOD基因是否转录，即检测是否生成相应的mRNA，可用标记的SOD基因（目的基因）作为探针进行分子杂交检测。
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