Question

【题目】乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类革兰氏阳性细菌的总称，经革兰氏染色后呈紫色。分离乳酸菌常用MRS固体培养基：蛋白5g、牛肉膏5g、酵母提取物2.5g、柠檬酸二铵1g、水500mL、乙酸钠2.5g、K2HPO4 1 g、MNSO4.●4H2O 0.125g、琼脂12.5g、MgSO4●7H2O 0.29g、CaCO35g、葡萄糖10g。请回答：

(1)MRS培养基中琼脂的作用是____。MRS培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，灭菌时设置的压力和时间分别为_____、_____。灭菌后制作平板用于实验，对平板进行无菌检测的方法是______。使用涂布法分离乳酸菌，培养后发现平板上形成的单菌落周围会产生CaCO3溶解圈，溶解圈大小能够反映_______。

(2)若用革兰氏染色法对大肠杆菌进行染色，结果______ (填“是”或“否”)呈紫色。

(3)用乳酸菌制作酸乳时，可对乳酸菌进行固定化处理，方法为：称取适量海藻酸钠配成水溶液，加入乳酸菌并搅拌均匀，以一定速度滴入CaCI2溶液中形成凝胶，使其凝固成珠状。上述采用的固定方法是_______，凝胶珠捞出后要用无菌水冲洗，目的是洗去______。

(4)乳酸菌可用于泡菜制作。在对泡菜制作过程中的亚硝酸盐定量检测时，若样液测定时的比色杯光程小于制作标准曲线时的比色杯光程，则测得的样液中亚硝酸盐含量___ (填“偏大”或“偏小”或“不影响”)；若泡菜样液测得的OD值过大，超出标准曲线，则最适宜的做法是___。

Answer 1

【答案】凝固剂 500g/cm2 30分钟 将空白平板置于37℃恒温箱培养24小时，观察有无杂菌生长 乳酸菌产乳酸的量的大小（答“乳酸菌产乳酸的能力的大小”给分） 否 包埋法 凝珠表面的CaCl2溶液 偏小 对样品溶液进行适当稀释

【解析】

（1）琼脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，在常规培养条件下呈固态。（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，培养基配制时全程要求无菌操作，常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。不同种类的微生物往往需要不同的培养温度和培养时间，细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。为了检测培养基平板灭菌是否合格或培养过程中是否被杂菌污染，在培养接种物时还应设置一个无菌的平板作为对照。（3）利用溶钙圈法对乳酸菌进行筛选的原理是乳酸菌产生的酸性物质和CaCO3反应而出现溶解圈。革兰氏阳性细菌经革兰氏染色后呈紫色。（4）固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。细胞个大，难以被吸附或结合，多采用包埋法固定化。（5）测定亚硝酸盐含量的操作步骤是：①分别在待测样品溶液和已知浓度的亚硝酸盐溶液(标准溶液)中加入等量显色剂。②在两个光程为1 cm的比色杯中分别加入样品溶液和标准液。③分别将两个比色杯在550 nm处测定光密度值（OD值）。④通过换算，即可知两个比色杯中待测物质的比例。因一杯中为已知浓度的亚硝酸盐溶液，则可得待测样品中亚硝酸盐浓度。

(1) 琼脂在常规培养条件下呈固态，因此在MRS培养基中，琼脂的作用是凝固剂。采用高压蒸汽灭菌法对MRS培养基进行灭菌时，设置的压力和时间分别为500g/cm2、30分钟。为了检测培养基平板灭菌是否合格，需要将灭菌后的空白平板置于37℃恒温箱培养24小时，观察有无杂菌生长。乳酸菌产生的乳酸和CaCO3反应而出现溶解圈，溶解圈的大小能够反映乳酸菌产乳酸的量的大小。

(2) 大肠杆菌是革兰氏阴性细菌，用革兰氏染色法对大肠杆菌进行染色，结果不会呈现紫色。

(3) 分析题文描述可知：对乳酸菌进行固定化处理，采用的是包埋法。将新制得的固定化乳酸菌凝胶珠用无菌水冲洗，其目的是洗去凝胶珠表面的CaCl2溶液。

(4) 在对泡菜制作过程中的亚硝酸盐定量检测时，若样液测定时的比色杯光程小于制作标准曲线时的比色杯光程，则测得的样液中亚硝酸盐含量偏小。若泡菜样液测得的OD值过大，超出标准曲线，则最适宜的做法是对样品溶液进行适当稀释。