题目内容
【题目】Ⅰ狂犬病是由狂犬病病毒引起的人畜共患的烈性传染病,制备鼠源性抗狂犬病病毒单克隆抗体是检测狂犬病病毒、治疗狂犬病的有效措施之一。请回答下列问题:
(1)用狂犬病病毒的RRIG蛋白免疫小鼠,一段时间后,若小鼠血清中检出_________的抗体,则说明小鼠产生了免疫反应。再从小鼠脾细胞中获取______,然后将其一与骨髓瘤细 胞融合。
(2)在细胞融合完成后,筛选出杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是_____
(3)得到的单克隆抗体能准确地识别出RRIG蛋白,原因是单克隆抗体具有 ________的特性。
Ⅱ转基因抗病甜椒的培育过程如图所示。质粒上有Pst I、Sina I、EcoR I、 Apa I等四种限制酶切割位点。请回答:
(1)构建含抗病基因的表达载体A时,应选用限制酶_____,对____进行切割。
(2)通常采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时,受体应选_____(填“正常叶”或“损伤叶”),原因是 ____________。
(3)培养基中的卡那霉素会抑制甜椒愈伤组织细胞的生长,欲利用该培养基筛选己导入抗病基因的甜椒细胞,应使A中含有________,作为标记基因。
(4)在适宜条件下,图中①培养基中生长素与细胞分裂素的比例适中,且生长素的含量___(填“低于”或“等于”或“高于”)细胞分裂素时,主要诱导植物组 织________________。
【答案】抗RRIG蛋白 B淋巴细胞 无限增殖且能产生专一性抗体 特异性强 灵敏度高 PstⅠ、EcoRⅠ 含抗病基因的DNA、质粒 损伤叶 植物受到损伤时伤口处细胞会分泌大量的酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞 抗卡那霉素基因 高于 脱分化
【解析】
1.基因工程技术的基本步骤:
(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2.农杆菌转化法的原理:农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点,如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上,通过农杆菌的转化作用,就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。
Ⅰ. (1)用狂犬病毒的RRIG蛋白对小鼠进行注射,使小鼠产生免疫反应,若在血清中产生相应的抗体,则可从小鼠的脾脏细胞中得到产生该抗体的B淋巴细胞。
(2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后,再用特定的选择培养基进行筛选,在培养基上未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡。只有融合的细胞才能生长,这种杂交瘤细胞的特点是既能无限增殖,又能产生专一的抗体。
(3)单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高,并可大量制备。
Ⅱ.(1)含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点,但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上,对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构,所以要获得抗病基因,不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割,要获得含抗病基因的重组质粒,应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶对含抗病基因的DNA、质粒进行切割。
(2)通常采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时,受体应选损伤叶,这是因为植物受到损伤时伤口处细胞会分泌大量的酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞,增大导入成功率。
(3)欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的甜椒细胞,重组质粒中应同时含有抗卡那霉素基因,作为标记基因。
(4)根据植物细胞具有全能性的原理,利用组织培养技术能将香蕉组织细胞培育成植株,图中①表示脱分化过程,②表示再分化过程。在适宜条件下,图中①培养基中生长素与细胞分裂素的比例适中,且生长素的含量高于细胞分裂素时,主要诱导植物组织脱分化。