题目内容
【题目】研究人员从健康人肠道中分离筛选出乳酸杆菌，并对其进行体外益生特性（人工胃液耐受性、抑菌活性等）的研究。回答下列问题：
（1）乳酸杆菌培养基的配方中应含有水、_______________和无机盐这四类物质及维生素等。为便于形成菌落，该培养基应为________培养基，配制时应加入适量凝固剂——_______。培养基宜采用__________法进行灭菌，以杀死培养皿、培养基中的所有微生物，包括_______、__________。
（2）要对乳酸杆菌进行活菌计数，应采用的接种方法是_____________________，接种后必须置于适宜温度及__________（填“有氧”或“无氧”）条件下培养，所得菌落数比实际活菌数偏低的原因是__________________________________________________________。
（3）乳酸杆菌的抑菌活性研究：
用分离得到的三株乳酸杆菌对肠道中的三种其他细菌进行抑菌实验，结果如下表。
抑菌圈直径（mm） 细菌种类 乳酸杆菌菌株 | 大肠杆菌 | 粪肠球菌 | 金黄色葡萄球菌 |
LpMT－3 | 9.67 | 17.5 | 15.83 |
LpMT－5 | 9.17 | 18.5 | 16.17 |
LsAF－7 | 12.67 | 19.67 | 15.9 |
注：抑菌圈是乳酸杆菌在生活过程中分泌某些物质对其周围的其他细菌的生长产生抑制作用形成的透明圈。
根据实验结果，对粪肠球菌抑制作用最强的是__________菌株；乳酸杆菌对___________菌的抑制能力最弱。
（4）乳酸杆菌对人工胃液的耐受性研究：
①配制适宜浓度的胃蛋白酶溶液，滴加HCl调节pH至酸性制成人工胃液。宜采用下列____方法（填选项对应的字母）对人工胃液进行除菌，之后进行乳酸杆菌耐受性测定。
A．过滤 B．干热灭菌 C．灼烧灭菌 D．酒精消毒
②胃液pH值在空腹时可低至1.5，正常饮食后胃液pH为3.0-5.0。食物在胃中停留时间约为1-2 h。研究发现，乳酸杆菌在pH为2.0的人工胃液中处理2h后的存活率几乎为0，而在pH为3.0的人工胃液中处理2 h后的存活率为86.65%。这一研究结果提示我们食用含有乳酸杆菌的酸奶应避免在____________时食用。
【答案】氮源和碳源 固体 琼脂 高压蒸汽 芽孢 孢子 稀释涂布平板法 无氧 当两个或多个活菌细胞连在一起，形成菌落时，平板上观察到的只是一个菌落 LsAF－7 大肠杆菌 A 空腹
【解析】
1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等根据用途分选择培养基、鉴别培养基；根据性质分为液体、半固体和固体培养基。
2、对微生物计数的方法：①间接计数法，即稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。该方法可以根据形成的菌落数量对菌体进行计数，由于菌落都是由活菌形成的，故该方法计数的都是活菌，由于菌落并不都是标准菌落，有的由少数几个细胞增殖形成的，因此该方法往往计数结果比实际结果偏低。
②显微镜计数法：即利用血球计数板和显微镜对微生物进行计数的方法，该方法计数的包括死菌和活菌在内，因此计数结果往往比实际结果偏高。
3、消毒和灭菌：
消毒 | 灭菌 | |
概念 | 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子） | 使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子） |
常用方法 | 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法 | 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 |
适用对象 | 操作空间、某些液体、双手等 | 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 |
（1）根据培养基的成分可知，乳酸杆菌培养基的配方中应含有水、碳源和氮源、无机盐这四类物质，以及添加维生素作为生长因子等。为便于形成菌落，该培养基应为固体培养基，配制时需要加入琼脂作为凝固剂。培养基配制后需要采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理，以杀死培养皿、培养基中的所有微生物，包括芽孢和孢子。
（2）稀释涂布平板法可以对活菌进行计数，故采用的接种方法是稀释涂布平板法，由于乳酸菌属于厌氧菌，因此接种后必须置于适宜温度及无氧的条件下培养，该计数方法是通过形成的菌落数目对菌体进行间接的计数，由于形成的菌落并不都是标准菌落，当两个或多个活菌细胞连在一起，形成菌落时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该计数方法导致所得菌落数比实际活菌数偏低。
（3）根据题意可知，抑菌圈是乳酸杆菌在生活过程中分泌某些物质对其周围的其他细菌的生长产生抑制作用形成的透明圈。分析表格中的数据可知，LsAF－7抑制粪肠球菌的作用最强，形成的抑菌圈直径最大。标中数据显示乳酸杆菌对大肠杆菌的抑制作用最弱，形成的抑菌圈直径相对最小。
（4）①人工胃液为非无菌溶液，如果对其有无菌要求，应注意采用0.22μm过滤除菌操作。综上所述，A正确，B、C、D错误。
②根据题意，胃液pH值在空腹时可低至1.5，正常饮食后胃液pH为3.0-5.0。而乳酸杆菌在pH为2.0的人工胃液中处理2h后的存活率几乎为0，而在pH为3.0的人工胃液中处理2 h后的存活率为86.65%。因此我们避免空腹食用含有乳酸杆菌的酸奶。
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