Question

7．内皮素（ET）是一种多肽，主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ET_A）结合而发挥生物学效应．科研人员通过构建表达载体，实现ET_A基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如下图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为，限制酶XhoⅠ的识别序列为．请据图分析回答：

（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、dNTP和反转录（逆转录）酶等．完成过程①②③的目的是获取目的基因（ET_A基因）．
（2）过程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是．
（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，进而可驱动基因的转录．除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是终止子．
（4）过程⑥要用CaCl₂预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的感受态细胞．
（5）将SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测ET_A基因能否表达及表达量．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：①②③表示反转录法获得目的基因的过程，④表示构建基因表达载体，⑤表示限制酶切割质粒，⑥表示重组质粒导入受体细胞，⑦表示目的基因的检测．

解答 解：（1）过程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入缓冲液、原料、逆转录酶和ATP和引物等，完成过程①②③的目的是 获取目的基因（ET_A基因）．
（2）过程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA获得目的基因的过程，限制酶使得DNA的磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是．
（3）目的基因上游的启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录，除图示结构外，完整的基因表达载体还应具有复制原点、终止子等结构．
（4）过程⑥中，要用CaCl₂预先处理大肠杆菌，使其成为处于容易吸收外界DNA的感受态的细胞．
（5）利用SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，目的是检测ET_A基因能否表达及表达量．
故答案为：
（1）反转录（逆转录）             获取目的基因（ET_A基因）
（2）磷酸二酯                     
（3）RNA聚合酶识别和结合          终止子
（4）感受态
（5）ET_A基因能否表达及表达量

点评 本题考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能结合图中信息并运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．