题目内容
【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶．它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．现要培育含目的基因D的大肠杆菌，请回答下列问题： 
（1）为了提高试验成功率，需要通过PCR扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该过程除需目的基因和dNTP （包括dATP、dGTP，dCTP、dTTP）之外还需提供和 ．
（2）图2中，启动子的作用是 ．
（3）分别用4种限制酶切割图1中的DNA片段，能形成黏性末端的是 ．
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 ． 为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率，需将大肠杆菌用进行处理．
（5）为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌图3所示的培养基上培养，得到如图3的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到图4所示的培养基上培养，得到如图4的结果（空圈表示与图3对照无菌落的位置）．请推测：图3和图4培养基里含的抗生素分别是 ， ． 图4中生长的大肠杆菌中是否有目的基因D？ ．
【答案】
（1）热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）；引物
（2）与RNA聚合酶结合，驱动基因转录出mRNA
（3）MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ
（4）BamHⅠ；Ca2+
（5）抗生素B；抗生素A；不含
【解析】解：（1）利用PCR技术扩增目的基因需要以目的基因为模板，以四种脱氧核苷酸作为原料，同时还需要热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）和引物．（2）启动子的作用是与RNA聚合酶结合，驱动基因转录出mRNA．（3）根据题干中提供的限制酶识别序列和切割位点可知，目的基因上均存在四种限制酶的识别序列，但是SmaⅠ限制酶切割得到的是平末端，其它三种酶切割得到的是黏性末端．（4）由图1可知，目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割．为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率，需将大肠杆菌用Ca2+进行处理，使大肠杆菌变为感受态细胞．（5）用限制酶BamHⅠ切割质粒后，用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌，能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；再用含有抗生素A的培养基培养，能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌，即图4中生长的大肠杆菌不含目的基因D． 所以答案是：（1）热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）；引物；（2）与RNA聚合酶结合，驱动基因转录出mRNA；（3）MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ；（4）BamHⅠ；Ca2+；（5）抗生素B；抗生素A；不含
【考点精析】本题主要考查了基因工程的原理及技术的相关知识点，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术才能正确解答此题．
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